Молекулярные подтипы рака молочной железы. Тройной негативный рак молочной железы. Биологические подтипы РМЖ

По распространенности рак молочной железы (РМЖ) занимает первое место среди онкологических заболеваний. Он поражает ежегодно 1 млн. 600 тыс. женщин в мире и свыше 66 тыс. в Российской Федерации.

В ближайшие 20 лет во всех странах прогнозируется почти двукратное увеличение заболеваемости женщин раком груди, что объясняется увеличением продолжительности жизни и улучшением методов диагностики.

За последние годы, благодаря более раннему выявлению опухолей, смертность от рака груди у женщин снижается. В развитых странах, где применяется маммографический скрининг населения, этот показатель снизился на 30–50%.

Биологические подтипы РМЖ

Рак молочной железы – это не единообразное заболевание. При лечении клиницисты учитывают принадлежность опухоли к конкретному подтипу. Генетическое тестирование и иммуногистохимический метод, позволяют надежно определить биологические подтипы РМЖ. Эти подтипы сами по себе включают многие факторы риска и предсказывающие признаки, что позволяет выбрать наиболее эффективную терапию для больного.

Доказанное с помощью молекулярно-генетического анализа и иммуногистохимического исследования патогенетическое разнообразие РМЖ позволяет индивидуализировать лечение.

Увеличение выживаемости при раке молочной железы связано не только с широкомасштабным внедрением маммографического скрининга, но и адекватным использованием системных видов лечения.

Диагностика рака молочной железы

Для выявления злокачественных опухолей молочной железы существует определенный алгоритм диагностики, и его первичный элемент - маммографический скрининг. Чувствительность этого метода диагностики для опухолей от 2 мм до 5 мм составляет около 85%. Маммографическое исследование выполняют в двух проекциях.

Молодым женщинам с плотным строением молочной железы необходимо включение в программу наблюдения методов УЗИ и МРТ.

Магнитно-резонансная томография

Поскольку традиционный маммографический скрининг у женщин до 40 лет малоэффективен, для скрининга может понадобиться альтернативная методика - МРТ. Современная контрастная магнитно-резонансная томография - высокочувствительный метод диагностики заболеваний молочной железы.

МРТ-диагностика рака молочной железы

Наследственные факторы риска рака молочной железы

Только 5–10% случаев рака молочной железы обусловлены унаследованными мутантными генами BRCA. Но при этом, среди носителей мутаций риск возникновения заболевания может достигать 80%.

Чем младше возраст выявления первичного заболевания рака груди, тем выше вероятность заболеть контралатеральным раком, т.е. противоположной молочной железы.

«Образование», уплотнения, узел, инфильтрат, опухоль, «шарик» — что-то подобные этому вы обнаружили. Это еще не повод решить, что у вас РМЖ, но повод показаться специалисту.
Деформация контура молочной железы, ареолы или соска (втяжение кожи или наоборот выбухание)
Втяжение соска; особенно, если появилось недавно
Выделение крови из соска
Отек кожи всей молочной железы или ее локального участка
Появление раздражения, мокнутые «ранки», язвочки, корочки на соске или ареоле
Изъязвления (длительные, без видимой причины) на коже груди
Дискомфорт в подмышечной области и обнаружение лимфоузлов («шариков») в подмышечной области
Изменение цвета кожи молочной железы — покраснение, повышение температуры кожи в этой области.

Все эти симптомы могут быть проявлениями различных заболеваний (их насчитывается несколько десятков), возможно, не злокачественной природы. Однако, это может решить только специалист по заболеваниям молочной железы.

Признаки и симптомы рака молочной железы

Стадии заболевания

0 стадия
Это стадия, когда не выявлена первичная опухоль, или она не может быть оценена, а также в случае неинвазивного рака молочной железы (что означает опухоль не выходит за границы своего появления, так называемый рак in situ).

1 стадия
Раковые клетки в этой стадии инвазируют или прорастают в соседние ткани. Опухолевый узел не более 2 см, лимфоузлы при этой стадии не поражены.

2 стадия
В этой стадии опухолевый узел превышает 2см и может достигать до 5см. При этой стадии могут быть поражены лимфоузлы, но поражение лимфоузлов носит одиночный характер, они не спаяны друг с другом и находятся на той же стороне, что и опухоль. В случае поражения лимфоузлов размер опухоли может быть и менее 2см.

3 стадия
Инвазивный рак, более 5 см или с явным и значительным поражением лимфатических узлов. При этом лимфоузлы могут быть спаяны между собой.

4 стадия
На этой стадии опухоль прорастает в кожу груди, грудную стенку либо во внутренние грудные лимфатические узлы. Она может быть любых размеров.

К 4 стадии рака молочной железы относится воспалительный рак, он встречается до 10 % всех случаев. Симптомы воспалительной формы рака груди это покраснение кожных покровов, железа становится теплой, отмечается увеличение и/или уплотнение части либо всей молочной железы. Кожа приобретает вид апельсиновой корки. Эту форму рака надо дифференцировать с воспалением молочной железы – маститом.

Также при 4 стадии опухоль может распространяться за пределы грудной клетки, в подмышечную область, внутренние грудные лимфатические узлы. Возможны метастазы в надключичные лимфатические узлы, а также в легкие, печень, кости или головной мозг.

Как выглядит рак груди в разных стадиях:

Методы лечения рака молочной железы

Хирургическое лечение

Хирургическая операция — основной метод лечения при опухолях груди, и от качества его проведения во многом зависит исход заболевания. По данным некоторых штатов Индии, в которых по религиозным мотивам не проводится хирургическое лечение, показатели заболеваемости практически равняются показателям смертности. Обычно смертность от РМЖ в два - четыре раза уступает заболеваемости.

Радикальная мастэктомия

Однако, после хирургического лечения чаще всего следует лучевое. Местное лечение без послеоперационной лучевой терапии часто приводит к локально-регионарным рецидивам заболевания. Дело в том, что после завершения хирургической операции невозможно исключить существования скрытых отдаленных метастазов. Даже у больных с опухолями менее 1 см в диаметре в 10% случаев возможен рецидив заболевания.

Локализация отдаленных метастазов при РМЖ

Органосохраняющие операции

Сейчас во всем мире наблюдается тенденция к сокращению объема хирургического вмешательства без потери эффективности. Хирургическое и лучевое лечение РМЖ развивается и совершенствуется в направлении органосохранения.

Благодаря внедрению маммографического скрининга, резко возросло число больных с ранней стадией заболевания, когда лимфоузлы не поражены метастазами. В этом случае «классическое» удаление всех уровней лимфоузлов было бы избыточной калечащей процедурой. На помощь хирургам пришел метод биопсии сигнальных (сторожевых) лимфатических узлов .

Поскольку, метастазы в подмышечных лимфоузлах появляются последовательно от первого ко второму, затем к третьему уровню, то достаточно определить наличие метастазов именно в первом лимфоузле. Его назвали «сигнальным»: если сигнальный лимфатический узел не содержит метастазов, то другие лимфоузлы также не метастатические.

Благодаря этому органосохраняющему методу, тысячи пациенток избежали избыточной полной хирургической диссекции, удаление раковой опухоли не привело к удалению груди.

Последние результаты клинических испытаний, в том числе и при участии НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова, подтвердили безопасность отказа от полной подмышечной диссекции. Биопсия сигнальных (сторожевых) лимфатических узлов постепенно вытесняет подмышечную диссекцию как стандартную процедуру стадирования РМЖ.

Концепция биопсии сигнальных лимфатических узлов приобретает все большее признание и введена для многих локализаций опухолей в стандарты хирургического лечения Европейской Организацией по Изучению и Лечению Рака (EORTC).

Химиотерапия

Химиотерапия , наряду с хирургическим вмешательством, является одним из основных методов терапии рака. Послеоперационная химиотерапия улучшает результаты хирургического лечения, как и прогноз заболевания.

Ранее решение о назначении химиотерапии основывалось на двух факторах:

стадия заболевания
состояние регионарных лимфоузлов.

Благодаря многочисленным исследованиям ученых изменяются представления о биологии рака молочной железы, и выбор режимов химиотерапии значительно расширяется. И сегодня химиотерапевтическое лечение назначают даже при отсутствии метастазов в лимфоузлах, если небольшие по размеру опухоли обладают агрессивными биологическими характеристиками.

Люминальный А рак
При люминальном А раке избегают назначать проведение химиотерапии, особенно при негативных лимфоузлах, и применяют одну эндокринотерапию.

Люминальный В рак
Люминальные В опухоли характеризуются высокой агрессивностью. В этом случае чаще всего будет назначена химиотерапия, а выбор лечения основывается на оценке риска развития рецидива.

HER2-позитивный рак молочной железы
Лечение HER2-позитивного рака молочной железы основано на применении стандартных схем химиотерапии – трастузумаб и ХТ, основанная на антрациклинах и таксанах. Однако, только небольшой процент пациентов выигрывает от лечения, но все подвержены связанной с этим токсичностью.

Трижды негативный РМЖ
Трижды негативный рак молочной железы обычно ассоциируется с плохим прогнозом. Из-за редкой встречаемости особых типов РМЖ нет достаточных данных о роли адъювантной химиотерапии.

Химиотерапия при РМЖ у очень молодых женщин
Рак молочной железы в молодом возрасте обычно протекает агрессивно, часто встречаются гормонорезистеные и HER2-позитивные опухоли с иными свойствами, чем у более пожилых женщин. Для таких пациенток, моложе 35 лет, адъювантная полихимиотерапия почти всегда является необходимым методом лечения.

Химиотерапия пожилых пациенток
У пожилых пациенток (старше 65 лет) при решении вопроса о назначении адъювантной химиотерапии обязательно учитываются общее состояние организма и наличие сопутствующих хронических заболеваний.

В идеале пожилые пациенты должны подвергаться гериатрической оценке для определения их «пригодности» к адъювантому лечению. Потенциальный эффект лечения должен быть сбалансирован с теми рисками для организма, которые несет химиотерапия. Врач определяет наиболее эффективный и при этом наиболее безопасный специфический режим, основываясь на подтипе опухоли и индивидуальных характеристиках пациента.

Гормонотерапия
Молодые женщины с гормоноположительным раком молочной железы сохраняют риск рецидива заболевания на протяжении по крайней мере 15 лет после первичного заболевания. Онкологи должны определить, кто из пациентов нуждается в долгосрочной адъювантной терапии тамоксифеном или ингибиторами ароматазы.

Неоадъюватная (предоперационная) терапия
Неоадъюватная терапия занимает ведущую роль в лечении женщин с неоперабельным раком молочной железы, а также имеет важное значение при операбельных опухолях, когда выполняются органосохраняющие операции.

Эффект неоадъювантного лечения ДО (слева) и ПОСЛЕ (справа)

Лучевая терапия

После проведенного хирургического вмешательства играет важную роль в терапии рака молочной железы и прогнозе заболевания. В НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова было проведено исследование роли лучевой терапии после органосохраняющих операций (секторальная резекция с аксиллярной лимфоаденэктомией) у пациенток с минимальным РМЖ.

Анализ десятилетней безрецидивной выживаемости доказал более высокую эффективность лечения в группе больных, где применялась послеоперационная лучевая терапия.

Стратегии профилактики РМЖ

Химиопрофилактика
Профилактические хирургические вмешательства
Коррекция образа жизни

Использование лекарственных препаратов для снижения риска заболевания называется химиопрофилактикой. На сегодняшний день одобренными препаратами для профилактики рака молочной железы являются тамоксифен и ралоксифен.

Тамоксифен может использоваться как пременопаузальными, так и постменопаузальными женщинами. Прием тамоксифена приводит к снижению риска РМЖ на 38% на более чем 10 летний период. Наиболее распространенными нежелательными явлениями на фоне приема препарата являются приливы.

В настоящее время клинические исследования изучают роль другого класса препаратов – ингибиторов ароматазы для оценки эффектов снижения риска РМЖ, которые сегодня используются только для лечения РМЖ. Предварительные результаты оказываются многообещающими. Ингибиторы ароматазы действуют только у женщин с нефункционирующими яичниками.

Профилактические хирургические операции по удалению молочных желез проводятся только в одном случае – если женщина является носителем мутаций в генах BRCA1 и BRCA2, известных как « ». Мировой практикой доказано, что при удалении ткани обеих молочных желез риски РМЖ снижаются более чем на 90%. Такие операции выполняются в клиниках США и Израиля. В Европе подход к этому вопросу более консервативный.

В НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова при проведении хирургического лечения женщинам с мутациями BRCA1 предлагается профилактическое удаление и реконструкция молочной железы.

Активный образ жизни идет на пользу и должен поддерживаться среди женщин, перенесших рак молочной железы. К этому единому мнению пришли в своих исследованиях эксперты таких мировых сообществ, как American Cancer Society (Американское онкологическое общество) и American College of Sports Medicine (Американская коллегия спортивной медицины). В дополнение к постоянной физической активности, эксперты рекомендуют женщинам удерживать постоянный вес и ограничивать потребление алкоголя, это также позволит снизить риск развития рака молочной железы.

Видео: вопросы и ответы по раку молочной железы

Раковые новообразования грудной железы занимают первую позицию в структуре женской онкопатологии. Доктора связывают этот факт с ухудшением экологической обстановки во всем мире и широким распространением оральных контрацептивов. Считается, что риск развития опухоли увеличивается многократно, если женщина длительно принимает гормональные комбинированные средства с целью контрацепции.

Трижды отрицательный рак молочной железы встречается в 15-25% всех видов новообразований этого органа. Выявление этой разновидности опухоли стало возможным с внедрением иммуногистохимического исследования в клиническую практику среди онкологов. О ней пойдет речь.

Суть проблемы

Тройной отрицательный рак молочной железы (ТНРМЖ) является разновидностью злокачественного образования, который характеризуется высокой агрессивностью. С позиций иммуногистохимического исследования это новообразование не имеет мишеней (рецепторных образований) к таким гормонам, как эстроген и прогестерон. Также эта опухоль не чувствительна к HER-2/NEU.

Отсутствие чувствительности атипических раковых тканей в случае трипл негативного рака создает большие проблемы для лечения. Ведь если нет описываемых рецепторных образований, то гормонотерапия не поможет. Когда трижды негативный рак молочной железы характеризуется отсутствием HER-2/Neu рецепторов, невозможно лечение с помощью герцептином, что лежит в основе эффективной и современной таргетной терапии.

Если новообразование имеет фенотип трижды негативного, рак молочной железы развивается быстро.

Значение скрининга при этом умаляется, так как во время промежутка между профилактическими осмотрами опухоль может достичь больших размеров.

Типы и подтипы рака молочной железы

Злокачественные опухоли с внедрением иммуногистохимии в клиническую практику стали классифицироваться в зависимости от наличия чувствительности к компонентам лечебных схем. Это важно для планирования терапии и осуществления индивидуализированного подхода к лечению онкологического заболевания.

Выделяют следующие фенотипические разновидности рака органа:

Последующее деление на подтипы основано на том, к какой разновидности клеток относится раковый конгломерат.

Когда новообразование молочной железы имеет фенотип трижды негативного, рак обычно гистологически относится к базальноклеточным опухолям. Этот подтип встречается в 70% диагностированного трипл-негативного рака.

Остальная треть пациентов при гистологическом исследовании оказывается небазальноклеточными вариантами новообразования. Следует отметить, что в последнем случае эффект от химотерапевтического воздействия оказывается ниже ожидаемого по сравнению с базальноклеточным раком.

Какие подтипы небазальноклеточного рака выявляются при морфологической диагностике?

Выделяют следующие подтипы:

Сочетание базальноклеточного и трижды негативного рака реализуется очень часто. Для этой разновидности рака молочной железы типична очень высокая пролиферативная активность.

То есть апоптоз (запрограммированная гибель клеточных структур) подавлена, в то время как возможность быстро делиться неуклонно возрастает. Этот факт обусловливает быстрый рост и прогрессию опухолевого процесса.

Клетки обладают очень низкой степенью дифференциации. Они близки к стволовым предшественникам. Ядерных структур в поле зрения гистолога встречается очень много. Такую опухоль отличает раннее метастазирование и неблагоприятный прогноз, а еще неэффективность таргетной и гормонотерапии.

Стадийность течения

Классификации опухолей молочной железы в своей основе имеют 3 важных пункта:

Существует градация опухолей по системе TMN. Она основана на размерах образования (T-tumor, опухоль), поражении региональных лимфоузлов (N-nodulus, узелок) и возникновении очагов отсева (M-metastasis, метастазы). Более широко используется классификация по стадиям.

Для нулевой стадии типично наличие небольшого новообразования. Оно редко проникает за пределы базальной мембраны. Эта разновидность рака носит название рак in situ – на месте. Метастазов и поражения лимфатических коллекторов при этой стадии еще нет.

На первой стадии опухолевые клетки уже выходят за пределы базальной мембраны. То есть при этом новообразование становится инвазивным. Оно приобретает клинически значимые размеры. Однако, диаметр опухоли не более, чем 20 мм. Вовлечения в процесс лимфатических коллекторов пока еще нет.

При следующей стадии раковой опухоли грудной железы возникает увеличение опухоли, и при этом она достигает 50 мм. Очаги отсева в регионарные лимфатические узлы формируются на стороне поражения. Опухоль сама по себе не прорастает соседние ткани и органы. На III стадии диаметр новообразования превышает 50 мм. Лимфоузлы заметно увеличиваются. Они плотно соединены с подлежащими органами, клетчаткой.

Наконец, четвертая стадия онкопатологии – терминальная. Размер новообразования может быть любым, но он обычно больше, чем 50 мм. Опухоль способна прорасти стенки соседних органов и тканей. Метастазы обнаруживаются в легочной, печеночной ткани, а также в головном мозге. Обычно на этой стадии болезнь неоперабельна и инкурабельна.

Лечение

Рак органа лечится несколькими способами. Их выбор основан на разновидности новообразования, его гистологическом строении, иммуногистохимических особенностях.

На возможность хирургического лечения также влияет размеры опухоли и метастазирование в отдаленные органы.

Таргетная и гормонотерапия

Адресное лечение, или таргетная терапия – относительно молодая отрасль лечения онкологических заболеваний. В своей основе этот метод имеет воздействие на определенные участки опухолевых клеток.

Так, в большинстве случаев рак молочной железы при гистохимическом анализе имеет рецепторы к HER-2/Neu. На этот субстрат изобретены лекарства – герцептины. Но при трипл-отрицательном раке и это лечение не принесет эффекта в виде уменьшения размеры новообразования.

Гормонотерапия успешно используется при люминальных разновидностях опухоли. Это связано с наличием у раковых клеток рецепторов к эстрогену и прогестерону. Однако этот вид консервативного лечения бесперспективен для пациентов, у которых диагностирован трижды отрицательный рак молочной железы.

Отсутствие рецепторов к потенциальным лекарственным агентам обусловливает отсутствие эффекта от такой терапии.

Медикаментозное лечение

Лечение при помощи химических медикаментов – антиметаболитов наиболее успешно при тройном негативном злокачественном новообразовании молочной железы. Существуют различные схемы такого лечения.

Показатель пятилетней выживаемости невысокий. Это связано с частыми рецидивами заболеваниями через несколько сеансов химиотерапевтического лечения.

Кроме того, есть зависимость этого показателя от своевременности диагностики. При выявлении 3 или 4 (терминальной) стадии трижды негативный рак молочной железы тяжело поддается лечению.

Биологическое поведение опухоли, в частности, рака молочной железы (РМЖ), зависит от характеристик ее клеток и от микроокружения. Нами впервые проведено исследование пролиферативных свойств опухолевых клеток и тканевого состава лимфоцитарных субпопуляций в зависимости от молекулярно-биологического подтипа РМЖ. Показано, что люминальный А подтип по данным критериям является наиболее благоприятным (минимальное содержание анеуплоидных опухолевых клеток; высокое содержание NК-лимфоцитов). РМЖ Her2+neu подтипа демонстрирует высокое содержание NК-лимфоцитов в перитумаральной зоне, но не в опухоли. Высокое количество анеуплоидных клеток найдено при люминальном В подтипе, клеток в S-фазе – при ТНР. Описанные различия позволяют оценить молекулярно-биологические подтипы рака молочной железы с ранее не исследованных позиций и ставят задачу изучения возможности прогнозирования течения заболевания с помощью полученных данных.

рак молочной железы

молекулярно-биологические подтипы

тканевые лимфоциты

ДНК-цитометрия

пролиферация

1. Кит О.И., Шатова Ю.С., Новикова И.А., Владимирова Л.Ю., Ульянова Е.П., Комова Е.А., Кечеджиева Э.Э. Экспрессия p53 и BCL2 при различных подтипах рака молочной железы // Фундаментальные исследования. – 2014. – № 10. – С. 85–88.

2. Летягин В.П. Варианты иммунофенотипа рака молочной железы и их клиническое значение для прогноза / В.П. Летягин, Н.Н. Тупицын, Е.В. Артамонова // VII российская онкологическая конференция: матер. конф. – М., 2003. – С. 50–53.

3. Новоселова К.А. Проточная ДНК-цитометрия в прогнозировании течения злокачественных лимфом / К.А. Новоселова, И.Б. Лысенко, И.А. Новикова // Сибирский онкологический журнал. – 2012. – Прилож. № 1. – С. 114.

4. Опыт применения проточной ДНК-цитометрии для прогнозирования течения злокачественных новообразований / Т.Г. Николаева, Я.В. Добрынин, В.П. Летягин и др. // Вестник Российской Академии медицинских наук: ежемесячный научно-теоретический журнал. – 2002. – №1. – С. 45–49.

5. Шамилов Ф.А. Субпопуляции интратуморальных лимфоцитов при раке молочной железы // Онкология. – 2012. – № 2. – С. 60–65.

6. Ki 67 index, HER-2 status, and prognosis of patients with luminal B breast cancer / M.C.U. Cheang, S.K. Chia, D. Voduc, D. Gao, S. Leung, J. Snider et al. //. Journal of the National Cancer Institute. – 2009. – № 101. – P. 736–750.

7. Molecular portraits of human breast tumors / C.M. Perou, T. Sorlie, M.B. Eisen, M. Rijn, S.S. Jeffrey, C.A. Rees et al. // Nature. – 2000. – № 406. – P. 747–752.

8. Subtyping of breast cancer by immnohistochemistry to investigate a relationship between subtype and short and long term survival: a collaborative analysis of data for 10,159 cases from 12 studies / F.M. Blows, K.E. Driver, M.K. Schmidt, A. Broeks, F.E. Leeuwen, J. Wesselling et al. // PLos Med. – 2010. – № 7. – Р. 279.

Биологическое поведение злокачественной опухоли, которое характеризует скорость ее роста, способность к инвазии и распространению, а, в конечном итоге, и прогноз заболевания, зависит от многих причин, связанных как с ее особенностями, так и с эффективностью или неэффективностью системных защитных механизмов, среди которых важное место занимают иммунные. По-видимому, свойства опухоли и реакции иммунной системы организма на нее тесно взаимосвязаны. С учетом значения иммунокомпетентных клеток в процессах апоптоза, пролиферации, неоангиогенеза (в частности, через продукцию цитокинов), их роль в микроокружении опухоли представляется существенной, однако, не полностью проясненной.

Рак молочной железы (РМЖ) является самой распространенной злокачественной опухолью среди женского населения планеты, и, несмотря на то, что его патогенезу, ранней диагностике и разработке новых методов лечения посвящено множество работ, продолжает оставаться актуальнейшей проблемой онкологии и медицины в целом.

Серьезный прорыв в изучении этого заболевания был сделан с появлением новых методов характеристики опухолевых клеток, в частности, иммуногистохимического (ИГХ)-типирования и ДНК-цитометрии. На основании их результатов были выделены молекулярно-биологические подтипы РМЖ и установлено, что они отличаются различным характером течения, по-разному поддаются химиотерапии и имеют неодинаковый прогноз. Молекулярно-генетическая классификация РМЖ, разработанная на основе иммуногистохимического определения четырех маркеров, была одобрена экспертами Сент-Галленской конференции в 2011 г и уточнена в 2013 г. Эти маркеры (рецепторы эстрогена, прогестерона, Her2+/neu, Кi-67) оцениваются в большинстве работ для решения вопроса о целесообразности назначения гормональной и химиотерапии . Представляется возможной связь подтипов РМЖ с экспрессией опухолевыми клетками рецепторов, характеризующих апоптоз . Согласно данным современной литературы, признаком агрессивного биологического поведения опухоли является анеуплоидия, при которой частота лимфогенного метастазирования различных опухолей существенно повышается; у больных с анеуплоидными опухолями выше частота рецидивов и короче продолжительность клинической ремиссии. ДНК-цитометрические характеристики опухолевых клеток могут прогнозировать их биологические свойства поведение опухоли в будущем . В немногочисленных сообщениях описана лимфоцитарная инфильтрация при РМЖ , но не найдено работ, сопоставляющих молекулярно-биологические подтипы РМЖ с пролиферативными свойствами опухоли и особенностями ее лимфоцитарного микроокружения.

Целью работы является характеристика иммунологического микроокружения и пролиферативных свойств опухоли при различных молекулярно-биологических подтипах РМЖ.

Материалы и методы исследования

Материалом для исследования послужили кровь и ткани опухоли и перитуморальной зоны 49 пациенток различными молекулярно-биологическими подтипами РМЖ; у 16 (32,7 %) был определен люминальный А подтип, у 22 (44,9 %) - люминальный В, у 5 - Her2+/neu (10,2 %), у 6 - ТНР (12,2 %). Гомогенизацию тканей осуществляли с использованием BD Medimaсhine. Анализ экспрессии (не менее 20 000 клеток) проводили на проточном цитометре FACSCantoII (Becton Dickinson, USA). Для тестирования и подтверждения оптимальной работы проточного цитометра использовали универсальные биологические частицы DNA QC Particles (BD). Для анализа ДНК в ткани опухоли использовали CycleTESTTMPLUS DNA Reagent Kit. Полученные данные обрабатывали с помощью компьютерной программы ModFit LT, позволяющей анализировать плоидность и распределение клеток опухоли по фазам клеточного цикла и детализировать число клеток в фазах S и G2 + М. Долю клеток с различным содержанием ДНК на гистограмме вычисляли как процент от общего числа исследованных клеток. Опухоль считали диплоидной, если выявлялся один пик, который соответствовал нормальному содержанию ДНК в ядрах клеток. При наличии пиков, отличающихся от диплоидного, опухоль расценивалась как анеуплоидная. Для характеристики степени анеуплоидии клеток опухоли вычисляли индекс ДНК (ИДНК), который характеризует отношение интенсивности флуоресценции пика анеуплоидных клеток (номер канала) к диплоидному. Пролиферативную активность опухолевых клеток оценивали по индексу пролиферации (ИП) - сумме клеток, находящихся в синтетической, постсинтетической фазах цикла и в митозе (S+G2+M).

Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови, ткани опухоли и перитуморальной зоны (ПЗ) оценивали с использованием моноклональных антител панели Т-В-NK (CD3, CD4, CD8, CD19, CD16/56) и CD45. Доля лимфоцитов, положительных по данным маркерам, вычислялась в процентах от общего числа CD45-положительных лимфоцитов. В случае ткани исследовалось не менее 1000 тыс. событий, крови - не менее 30 тыс. событий.

Статистическую обработку результатов проводили параметрическими и непараметрическими методами (t-критерий Стьюдента, критерий Уилкоксона).

Результаты исследования и их обсуждение

Результаты исследования субпопуляций лимфоцитов в крови и в тканевых образцах представлены в табл. 1, 2. Как видно из табл. 1, ткань опухоли характеризовалась статистически достоверно более высоким содержанием Т-лимфоцитов, преимущественно за счет CD3+CD8+ клеток; при этом процент В- и NК-клеток в ней был ниже, чем в крови. В ткани ПЗ наблюдались отличия как от крови, так и от опухоли: в ней отмечено более высокое количество CD3+ и CD3+CD8+ клеток и более низкое CD19+ лимфоцитов, чем в крови; процент CD3+CD4+ лимфоцитов был ниже, а уровень CD3+CD16/56+ выше, чем в опухоли.

В табл. 2 приведено сопоставление субпопуляционного состава тканевых лимфоцитов больных при различных молекулярно-биологических подтипах РМЖ.

Таблица 1

Субпопуляционный состав лимфоцитов в крови и в тканях больных РМЖ

Примечание: * - статистически достоверные отличия от показателей периферической крови; ** - статистически достоверные отличия от показателя ПЗ (Р ≤ 0,05).

Таблица 2

Субпопуляционный состав лимфоцитов опухоли при различных молекулярно-биологических подтипах РМЖ

Примечание: * - статистически достоверные отличия от люминального А подтипа (Р ≤ 0,05).

Как видно из табл. 2, отмечаются некоторые различия по составу субпопуляций лимфоцитов, присутствующих в образцах тканей опухоли в зависимости от молекулярно-биологического подтипа РМЖ. Так, в опухолевой ткани максимальное количество CD3+ клеток оказалось при ТНР, хотя статистически достоверные различия установлены только от люминального А РМЖ. (Р ≤ 0,05). При люминальном А РМЖ обнаружен наибольший уровень NК-клеток в опухолевой ткани, статистически значимо превышающий показатели люминального В и ТНР РМЖ (в обоих случаях Р ≤ 0,05).

При изучении ткани ПЗ обнаружен наиболее высокий уровень NК-клеток при Her2+/neu+ РМЖ по сравнению с другими вариантами заболевания (23,1 ± 4,75 %); кроме того, он был в 3 раза выше, чем в опухолевой ткани этих же больных. В тех же образцах ткани ПЗ количество CD3+ и CD3+CD4+ оказалось ниже, чем в ткани опухоли (70,4 ± 2,6 и 88,6 ± 6,5 % для СD3+; 33,1 ± 5,2 и 47,4 ± 3,5 % для СD3+СD4+ соответственно; в обоих случаях Р ≤ 0,05). Сходные различия между лимфоцитарным составом ткани опухоли и ПЗ отмечены и при люминальном В РМЖ: уровень CD3+CD4+ в ткани ПЗ составлял 34,4 ± 4,2 %, что статистически достоверно ниже показателя в ткани опухоли (46,66 ± 3,3 %); Р ≤ 0,05.

Результаты исследования ДНК-цитометрических параметров опухолей представлены в табл. 3. Минимальная доля анеуплоидных опухолей выявлена при люминальном А, средняя при люминальном В и максимальная при THР. Результаты ДНК-цитометрического анализа Her2+/neu РМЖ в данную работу не включены. При РМЖ люминального А подтипа доля анеуплоидных опухолей составила 12,5 %, где 2 из 16 образцов характеризовались уровнем ДНК, отличным от 1,0, тогда как в группе опухолей люминального В подтипа их доля составила 45,5 % (10 из 22 опухолей), а в группе THР - 50 % (3 из 6).

Опухоли с ИДНК менее 1,0 не встретились ни в одном из подтипов анеуплоидного РМЖ (люминального А, люминального В, THР). В РМЖ люминального А подтипа ИДНК в среднем составил 1,67 ± 0,2; при люминальном В подтипе ИДНК - от 1,1 до 2,0, в среднем 1,67 ± 0,1; при THР подтипе - от 1,49 до 1,76, в среднем 1,63 ± 0,07. Статистически достоверных различий в средних показателях ИНДК между опухолями различных молекулярных подтипов не получено. В опухолях с люминальным А подтипом в 50 % (1 из 2 анеуплоидных опухолей) ИДНК находился в пределах до 1,5; в 50 % превышал 1,5. Практически с одинаковой частотой в 30 % (3 из 10 анеуплоидных опухолей) и 33,3 % (1 из 3),соответственно при РМЖ люминального В и THР подтипов отмечено наличие опухолей с ИНДК до 1,5, где превалировали опухоли с индексом ДНК свыше 1,5.

Злокачественные опухоли, как правило, являются гетерогенными, т.е. в одной опухоли могут сочетаться диплоидные и анеуплоидные клетки, и одним из определяющих биологическое поведение опухоли может быть характеристика среднего содержания в ней анеуплоидных клеток. Проведенный анализ выявил, что среднее содержание анеуплоидных клеток в опухолях люминального А подтипа составило 8,49 ± 0,9 %, а в THР - 17,6 ± 3,2 %. Максимальное содержание анеуплоидных клеток (26,5 ± 2,8 %) отмечено в опухолях люминального В подтипа, что в 3,1 и 1,5 раза выше, чем в опухолях люминального А и THР подтипов соответственно (Р ≤ 0,05).

Распределение клеток по фазам клеточного цикла опухолей молочной железы люминального А, люминального В и THР подтипов представлено в табл. 3.

Как видно из табл. 3, в опухолях исследуемых подтипов основная масса клеток находилась в G0/1-фазе клеточного цикла. Статистически достоверной разницы в показателях доли клеток в G0/G1- и G2+M-фазах клеточного цикла между различными молекулярными подтипами не получено. Темпы пролиферации опухолей THР молекулярного подтипа, определяемые по доле клеток в S-фазе клеточного цикла, статистически значимо превосходили аналогичный показатель опухолей люминального В подтипа (Р ≤ 0,05). Статистически достоверных различий в темпах пролиферации опухолей люминального А и люминального В подтипа, а также люминального А и THР молекулярных подтипов не получено, хотя отмечена тенденция к повышению доли клеток в S-фазе опухолей люминального А подтипа по сравнению с люминальным В.

Таблица 3

Распределение клеток по фазам клеточного цикла при различных молекулярно-биологических подтипах РМЖ (%)

Примечание: * - отличия показателей статистически достоверны по отношению к люминальному В подтипу (Р ≤ 0,05).

Пролиферативная активность является одним из ведущих факторов биологического поведения опухоли. При сравнении ИП статистически достоверной разницы при люминальном А, люминальном В и THР подтипах РМЖ не выявлено, хотя в опухолях THР подтипа отмечена тенденция к его повышению в сравнении с люминальными А и В.

Итак, статистически значимые различия пролиферативных характеристик исследованных молекулярно-биологических подтипов РМЖ были получены только по частоте анеуплоидии и проценту анеуплоидных опухолевых клеток, а также по количеству клеток в S-фазе клеточного цикла. Данные показатели были минимальны при люминальном А подтипе. При сравнении люминального В и ТНР подтипов их характеристики анеуплоидии не различались, но процент клеток в S-фазе был наибольшим в ТНР опухолях, что, по-видимому, и обуславливает их более злокачественное течение.

Лимфоцитарная инфильтрация РМЖ может быть различной, т.к. антигенный его состав неоднороден: наличие или отсутствие экспрессии опухолевыми клетками РЭА, MUC-1, HLA I и II класса ассоциировано с различной степенью вовлеченности иммунокомпетентных клеток в противоопухолевый ответ . Нами показаны различия содержания NК-лимфоцитов - эффекторных клеток врожденного иммунитета, участвующих в антиген-независимом лизисе мишеней, в опухолях изученных молекулярно-биологических подтипов РМЖ. Количество этих клеток при люминальном А подтипе было выше, чем при других. Учитывая, что опухолевые клетки нередко являются HLA-негативными , и, следовательно, представляют возможную мишень не для цитотоксических (СD8+) Т -лимфоцитов, прогностическая роль которых описана для HLA-DR позитивных опухолей , а именно для натуральных киллеров, мы считаем, что полученные нами данные характеризуют люминальный А подтип РМЖ как наиболее благоприятный по особенностям его лимфоцитарного окружения. Этот же подтип РМЖ отличается минимальным среди всех содержанием анеуплоидных опухолевых клеток. Люминальный В подтип при наименьшем количестве опухолевых клеток в S-фазе демонстрирует высокую частоту анеуплоидных клеток и опухолей; микроокружение характеризуется низким уровнем NК-клеток и повышением содержания СD3+СD4+ клеток в опухоли по сравнению с ПЗ. ТНР подтип содержит высокое количество опухолевых клеток в S-фазе при высоком содержании анеуплоидных клеток; в окружении находится наибольшее количество Т(СD3+) - и низкое - NК-лимфоцитов. РМЖ Her2+/neu подтипа отличается высоким содержанием NК-клеток в перитуморальной зоне, но не в опухоли.

Библиографическая ссылка

Новикова И.А., Шатова Ю.С., Златник Е.Ю., Пржедецкий Ю.В., Ульянова Е.П., Черникова Е.Н. ПРОЛИФЕРАТИВНЫЕ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИХ ПОДТИПОВ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. – 2014. – № 11-1. – С. 116-119;
URL: https://applied-research.ru/ru/article/view?id=6086 (дата обращения: 12.08.2019). Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»

На протяжении 2015года раком молочной железы заболело примерно 15 тысяч женщин в Украине, в соотношении количества населения данные Российской Федерации в процентном отношении не на много отличаются от соседей.

Исходя из доклада на Всемирной ассоциации врачей-онкологов,смертность среди заболевших раком молочной железы достигает 35%-55%, а за первые 12 месяцев заболевания не снижается ниже 15%.

Читайте в этой статье

Достижения науки для снижения смертности от онкологии

По данным статистических данных ВОЗ число заболевших с каждым годом увеличивается. Это не связывается с затратными пропагандистскими компаниями ВОЗ, типа борьбы с противопехотными минами, когда на соответствующую рекламу было выброшено более 100 мл долларов. Многие женщины во всём мире стали сами больше обращать внимание на своё здоровье, при любых проблемах молочной железы немедленно обращаются к врачу-специалисту. По последним данным раннее распознавание онкологического процесса в условиях лечебного учреждения составляет только 45%.

Появление более современного оборудования, обладающего большим спектром разрешения, общее старение населения Земли и совершенствование методов диагностики привели в последнее время к росту выявления онкологических проблем молочной железы у большего количества обследованных женщин.

Основной проблемой злокачественных заболеваний молочной железы у женщин становится поздняя обращаемость к врачам-онкологам, что позволяет диагностировать процесс уже на 3-4 стадии рака. При этом, процент успешного вылечивания больных не превышает 35%-40%, а смертность в течении первого года после радикальной операции составляет 22%.

Многие женщины оценивают своё состояние исходя из знаменитого тезиса, что “Онкология-это смерть’. Но это в корне не верно. Основой качественного лечения онкологических процессов молочной железы в последнее время стало внедрение современных методов диагностики, стандартизация лечения с использованием протоколов ВОЗ, совершенствование применяемых . По таким принципам работают ведущие онкологические клиники мира. По данным Института рака США, выживаемость в течении первых пяти лет после выявления онкологического заболевания молочной железы составляет 80%-85%.

Выявление рака молочной железы

Для выявления возможности заболевания необходимо учитывать различные факторы риска. По виду воздействия на организм женщины, они подразделяются на три больших категории:

Деятельность детородной системы организма женщины. Сюда относятся различные воспалительные заболевания матки и яичников, проблемы менструальной, половой и функции грудного вскармливания;
Различная сопутствующая соматическая патология женского организма. Об этом можно говорить много. Все хронические заболевания женщины могут способствовать малигнизации воспалительных процессов в молочной железе. Сахарный диабет, атеросклероз сосудов ССС, проблемы печени и поджелудочной железы и, разумеется, различные гормональные нарушения женского организма, типа дисгормональной гиперплазии молочных желёз могут стать пусковым механизмом развития рака молочной железы;
Различные генетические факторы, если женщина является носителем BRCA-1 и BRCA-2 генов. Сюда можно отнести наследственный рак молочной железы, возможные комбинации рака молочной железы с саркомой, опухолью мозга, раком гортани и лёгкого.

Не менее важной причиной развития рака молочной железы является возраст женщины и различные гормональные нарушения. Если в промежутке от25 до 35 лет риск заболевания составляет 15%, то в 40-летнем возрасте говорят о 35% случаев. После 55-60 лет вероятность малигнизации доброкачественных процессов в молочной железе достигает 80%.

Воздействие различных гормонов, а в основном экстрагенов, увеличивают риск заболевания раком молочной железы практически в два раза.

Сюда можно отнести прерывание беременности и роды у женщин, старше 35 лет. По данным некоторых зарубежных авторов, у женщин, позволивших себе рождение ребёнка после сорока лет, риск развития рака молочной железы увеличивается в 4 раза.

Люминальный рак молочной железы

Гистологи выделяют в груди женщины два основных типа клеток: базальные и люминальные. По степени участия в развитии процесса перерождения определённого типа клеток говорят о форме рака молочной железы:

Люминальный тип рака молочной железы группы А (негативный статус);
Люминальный тип рака молочной железы группы В (позитивный статус);
Базальный вид онкообразования;
HER2- положительный тип.

Следует объяснить всем желающим, что люминальный рак молочной железы, А типа, положительно взаимодействует с эстрогенами и прогестероном, а люминальный онкологический процесс молочной железы типа В отличается антагонизмом к выше перечисленным женским гормонам.

Люминальный рак А молочной железы

Более распространён и составляет около 30% случаев заболеваемости. В основном данный патологический процесс поражает женщин с наступлением периода отсутствия менструации и связанных с этим состоянием гормональной перестройки организма. Гормональный фон женщины в постменопаузе особенно восприимчив к эстрогенам и прогестерону и их воздействию на эпителий клеток молочной железы.

Этот патологический процесс отличается высокой восприимчивостью к терапевтическим способам лечения и часто не требует оперативного вмешательства. Так же отличительной чертой этой формы рака молочной железы является низкий процент рецидивов и метастазирования.

Тип В люминальной формы рака молочной железы

Отличается практически является антагонистом воздействия женских половых гормонов и встречается в общей практике врача-онколога значительно реже. Только у 7%-9% заболевших женщин раком молочной железы цитологически выявляется эта форма развития болезни. Течение заболевания в этом случае носит более тяжёлый и затяжной характер, требует в 90% случаев оперативного лечения, часто сопровождается клиникой лимфостаза и в 40% случаев приводит к рецидиву опухоли.

Специфическое лечение данных форм течения болезни отсутствует. Как и при остальных формах рака молочной железы главным остаётся комплекс мероприятий, направленных на удаление поражённого органа или его части из организма женщины, проведение восстановительной медикаментозной терапии.

Последующее лечение зависит от состояния пациентки и направлено на улучшение качества жизни в послеоперационный период, проблемы физической и психологической реабилитации и максимальное противодействие возможным рецидивам этой патологии.

Содержание:

26 сентября 2012 г.: В рамках программы Раковый Геномный Атлас (TCGA) на основе 800 образцов раковых опухолей груди было построено соответствующее количество генетических карт. Основываясь на их анализе, сделаны определенные выводы. Так, несмотря на генетическое разнообразие заболевания, в нем можно выделить 4 подтипа. Также обнаружено удивительное сходство между одним из типов рака молочной железы и раком яичников.

Как указано в онлайн публикации журнала «Nature» от 23 сентября, открытие способствует лучшему пониманию природы рака груди и в свою очередь может оказать огромное влияние на разработку новых лечебных препаратов.

TCGA – это международная программа, реализуемая на базе Национального ракового Института (NCI) и Национального Института по изучению генома человека (NHGRI) в США. К работе в программе привлечены специалисты из разных стран мира. Главной целью TCGA является изучение свойств 20 генотипов рака.

Один из специалистов представляющий Университет Северной Каролины (UNC) Чарльз Перу рассказал прессе о том, что исследования призваны обеспечить комплексную систему знаний о генетических причинах появления рака молочной железы.

Они окажут влияние на клиническую медицину ближайших лет. Работа подтвердила многое, что уже было известно и главное она, без сомнения, важна для всех пациенток, имеющих рак груди.

Генетические причины наиболее распространенной формы рака молочной железы, эстроген-рецептор положительный / люминал A, стали гораздо яснее. Кроме того, обнаружено удивительное сходство между базальным подтипом рака молочной железы и яичников.

Четыре субтипа

Специалисты, работающие в программе TCGA, провели исследование опухолей двумя способами: сначала отбросив уже имеющиеся сведения, фактически с нуля. Потом провели анализ в контексте четырех, ранее известных, молекулярных подтипов рака молочной железы (HER2-обогащенный, люминал А, люминал В и Базальный подтип).

Оба подхода подтвердили факт существования четырех стабильных типов рака, несмотря на большое количество вариаций.

В исследованиях использовались шесть аналитических технологий. Их целью являлось стремление по-новому взглянуть на уже определенные подтипы рака. В ходе реализации одной из них был вскрыт ряд вероятных генетических причин появления рака молочной железы - Эстроген-рецептор положительного Люминала А. Это тип рака наиболее распространен в США, и от него умирает больше количество людей, чем от всякого другого типа рака.

Оказалось, что данный тип рака имеет наиболее разнообразные мутации даже у одного человека. Это замечательная весть в том смысле, что возможно воздействовать на них уже разработанными препаратами. В этой связи, открываются новые возможности для лечения пациентов.

Очередным открытием явилось то, что базальный тип опухолей молочной железы (известный как тройной негативный рак молочной железы) имеет сходные молекулярные характеристики с полноценной серозной опухолью яичников. Предполагается, что по происхождению они связаны друг с другом и в лечении этих болезней возможно применение одних и тех же препаратов.

Более того, ученые уверены, что базальный тип рака молочной железы и рак яичников более схоже друг с другом, чем любой ER-позитив/ люминал рака молочной железы. Возможно даже, что базальный тип рака молочной железы следует считать самостоятельным заболеванием.

Специалист Кэтрин Ходли из Университета Северной Каролины, пояснила:

«Наши возможности: сравнивать и интегрировать данные из РНК, микро РНК, мутаций и белков; метилировать ДНК; а также достаточное число копий ДНК. Все это дало нам множество идей о раке молочной железы».

Эти методы помогли обнаружить, в частности, каким образом отличаются типы базального рака молочной железы от других подтипов. Ходли добавила: "Эти результаты свидетельствуют о том, что тип базального рака молочной железы, хотя и имеет ту же локализацию, на самом деле, является совершенно иным заболеванием".