Функции. Группы крови - это генетически наследуемые признаки, не изменяющиеся в течение жизни при естественных условиях. Группа крови представляет собой определенное сочетание поверхностных антигенов эритроцитов (агглютиногенов) системы АВО.Определение групповой принадлежности широко используется в клинической практике при переливании крови и ее компонентов, в гинекологии и акушерстве при планировании и ведении беременности. Система групп крови AB0 является основной системой, определяющей совместимость и несовместимость переливаемой крови, т.к. составляющие ее антигены наиболее иммуногенны. Особенностью системы АВ0 является то, что в плазме у неиммунных людей имеются естественные антитела к отсутствующему на эритроцитах антигену. Систему группы крови АВ0 составляют два групповых эритроцитарных агглютиногена (А и В) и два соответствующих антитела - агглютинины плазмы альфа(анти-А) и бета(анти-В). Различные сочетания антигенов и антител образуют 4 группы крови:
- Группа 0(I) - на эритроцитах отсутствуют групповые агглютиногены, в плазме присутствуют агглютинины альфа и бета.
- Группа А(II) - эритроциты содержат только агглютиноген А, в плазме присутствует агглютинин бета;
- Группа В(III) - эритроциты содержат только агглютиноген В, в плазме содержится агглютинин альфа;
- Группа АВ(IV) - на эритроцитах присутствуют антигены А и В, плазма агглютининов не содержит.
Определение групп крови проводят путем идентификации специфических антигенов и антител (двойной метод, или перекрестная реакция).
Несовместимость крови наблюдается, если эритроциты одной крови несут агглютиногены (А или В), а в плазме другой крови содержатся соответствующие агглютинины (альфа- или бета), - при этом происходит реакция агглютинации.
Переливать эритроциты, плазму и особенно цельную кровь от донора к реципиенту нужно строго соблюдая групповую совместимость. Чтобы избежать несовместимости крови донора и реципиента, необходимо лабораторными методами точно определить их группы крови. Лучше всего переливать кровь, эритроциты и плазму той же группы, которая определена у реципиента. В экстренных случаях эритроциты группы 0 (но не цельную кровь!) можно переливать реципиентам с другими группами крови; эритроциты группы А можно переливать реципиентам с группой крови А и АВ, а эритроциты от донора группы В - реципиентам группы В и АВ.
Карты совместимости групп крови (агглютинация обозначена знаком +):
Кровь донора | Кровь реципиента |
|||
Эритроциты донора | Кровь реципиента |
|||
Групповые агглютиногены находятся в строме и оболочке эритроцитов. Антигены системы АВО выявляются не только на эритроцитах, но и на клетках других тканей или даже могут быть растворенными в слюне и других жидкостях организма. Развиваются они на ранних стадиях внутриутробного развития, и у новорожденного уже находятся в существенном количестве. Кровь новорожденных детей имеет возрастные особенности - в плазме могут еще не присутствовать характерные групповые агглютинины, которые начинают вырабатываться позже (постоянно обнаруживаются после 10 месяцев) и определение группы крови у новорожденных в этом случае проводится только по наличию антигенов системы АВО.
Помимо ситуаций, связанных с необходимостью переливания крови, определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребенка, который может приводить к гемолитической болезни новорожденных.
Гемолитическая болезнь новорожденных
Гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО-антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус-(С, Е, с, d, e) или М-, М-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам. Любой из указанных антигенов (чаще D-резус-антиген), проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в ее организме специфических антител. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты.. Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учета резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или выкидышей.
Существуют разновидности (слабые варианты) антигена А (в большей степени) и реже антигена В. Что касается антигена А, имеются варианты: "сильный" А1 (более 80%), слабый А2 (менее 20%), и еще более слабые (А3, А4, Ах - редко). Это теоретическое понятие имеет значение для переливания крови и может вызвать несчастные случаи при отнесении донора А2 (II) к группе 0 (I) или донора А2В (IV) - к группе В (III), поскольку слабая форма антигена А иногда обуславливает ошибки при определении группы крови системы АВO. Правильное определение слабых вариантов антигена А может требовать повторных исследований со специфическими реагентами.
Снижение или полное отсутствие естественных агглютининов альфа и бета иногда отмечается при иммунодефицитных состояниях:
- новообразования и болезни крови - болезнь Ходжкина, множественная миелома, хроническая лимфатическая лейкемия;
- врожденные гипо- и агаммаглобулинемия;
- у детей раннего возраста и у пожилых;
- иммуносупрессивная терапия;
- тяжелые инфекции.
Трудности при определении группы крови вследствие подавления реакции гемагглютинации возникают также после введения плазмозаменителей, переливания крови, трансплатации, септицемии и пр.
Наследование групп крови
В основе закономерностей наследования групп крови лежат следующие понятия. В локусе гена АВО возможны три варианта (аллеля) - 0, A и B, которые экспрессируются по аутосомно-кодоминантному типу. Это означает, что у лиц, унаследовавших гены А и В, экспрессируются продукты обоих этих генов, что приводит к образованию фенотипа АВ (IV). Фенотип А (II) может быть у человека, унаследовавшего от родителей или два гена А, или гены А и 0. Соответственно фенотип В (III) - при наследовании или двух генов В, или В и 0. Фенотип 0 (I) проявляется при наследовании двух генов 0. Таким образом, если оба родителя имеют II группу крови (генотипы AА или А0), кто-то из их детей может иметь первую группу (генотип 00). Если у одного из родителей группа крови A(II) с возможным генотипом АА и А0, а у другого B(III) с возможным генотипом BB или В0 - дети могут иметь группы крови 0(I), А(II), B(III) или АВ (!V).
- Гемолитическая болезнь новорожденных (выявление несовместимости крови матери и плода по системе АВ0);
- Предоперационная подготовка;
- Беременность (подготовка и наблюдение в динамике беременных с отрицательным резус-фактором)
Подготовка к исследованию: не требуется
При необходимости (обнаружение А2-подтипа) проводится дополнительное тестирование с использованием специфических реактивов.
Сроки исполнения: 1 день
Результат исследования:
- 0 (I) - первая группа,
- A (II) - вторая группа,
- B (III) - третья группа,
- AB (IV) - четвертая группа крови.
Резус-фактор Rh
Основной поверхностный эритроцитарный антиген системы резус, по которому оценивают резус-принадлежность человека.
Функции. Антиген Rh - один из эритроцитарных антигенов системы резус, располагается на поверхности эритроцитов. В системе резус различают 5 основных антигенов. Основным (наиболее иммуногенным) является антиген Rh (D), который обычно подразумевают под названием резус-фактор. Эритроциты примерно 85% людей несут этот белок, поэтому их относят к резус-положительным (позитивным). У 15 % людей его нет, они резус-отрицательны (негативны). Наличие резус-фактора не зависит от групповой принадлежности по системе АВ0, не изменяется в течение жизни, не зависит от внешних причин. Он появляется на ранних стадиях внутриутробного развития, и у новорожденного уже обнаруживается в существенном количестве. Определение резус принадлежности крови применяется в общей клинической практике при переливании крови и ее компонентов, а также в гинекологии и акушерстве при планировании и ведении беременности.
Несовместимость крови по резус-фактору (резус-конфликт) при переливании крови наблюдается, если эритроциты донора несут Rh -агглютиноген, а реципиент является резус-отрицательным. В этом случае у резус-отрицательного реципиента начинают вырабатываться антитела, направленные против резус-антигена, приводящие к разрушению эритроцитов. Переливать эритроциты, плазму и особенно цельную кровь от донора к реципиенту нужно строго соблюдая совместимость не только по группе крови, но и по резус-фактору. Присутствие и титр уже имеющихся в крови антител к резус-фактору и других аллоиммунных антител можно определить, указав тест "anti-Rh (титр)".
Определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребенка, который может приводить к гемолитической болезни новорожденных. Возникновение резус-конфликта и развитие гемолитической болезни новорожденных возможно в том случае, если беременная резус-отрицательна, а плод- резус-положителен. В случае, если у матери Rh +, а плод - резус - отрицателен, опасности гемолитической болезни для плода нет.
Гемолитическая болезнь плода и новорожденных
- гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь может быть обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО-антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус-(С, Е, с, d, e) или М-, N-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам (по статистике 98% случаев гемолитической болезни новорожденных связаны с D - резус-антигеном). Любой из указанных антигенов, проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в ее организме специфических антител. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты. Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учета резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или повторных выкидышей.
В настоящее время существует возможность медицинской профилактики развития резус-конфликта и гемолитической болезни новорожденных. Все резус-отрицательные женщины в период беременности должны находиться под наблюдением врача. Необходимо также контролировать в динамике уровень резус-антител.
Есть небольшая категория резус-положительных лиц, способных образовывать анти-резус антитела. Это лица, эритроциты которых характеризуются значительно сниженной экспрессией нормального антигена Rh на мембране ("слабый" D, Dweak) или экспрессией измененного антигена Rh (частичный D, Dpartial). Эти слабые варианты антигена D в лабораторной практике объединяют в группу Du , частота которой составляет около 1%.
Реципиенты, содержание антиген Du, должны быть отнесены к резус-отрицательным и им должна быть перелита только резус-отрицательная кровь, так как нормальный антиген D может вызвать у таких лиц иммунный ответ. Доноры с антигеном Du квалифицируются как резус-положительные доноры, так как переливание их крови может вызвать иммунный ответ у резус-отрицательных реципиентов, а в случае предшествующей сенсибилизации к антигену D - и тяжелые трансфузионные реакции.
Наследование резус-фактора крови.
В основе закономерностей наследования лежат следующие понятия. Ген, кодирующий резус-фактор D (Rh), является доминантным, аллельный ему ген d - рецессивным (резус-положительные люди могут иметь генотип DD или Dd, резус-отрицательные - только генотип dd). Человек получает от каждого из родителей по 1 гену - D или d, и у него возможны, таким образом, 3 варианта генотипа - DD, Dd или dd. В первых двух случаях (DD и Dd) анализ крови на резус фактор даст положительный результат. Только при генотипе dd человек будет иметь резус-отрицательную кровь.
Рассмотрим некоторые варианты сочетания генов, определяющих наличие резус фактора, у родителей и ребенка
- 1) Отец резус - позитивный (гомозигота, генотип DD), у матери резус - отрицательный (генотип dd). В этом случае все дети будут резус - положительными (вероятность 100%).
- 2) Отец резус - позитивный (гетерозигота, генотип Dd), мать - резус- отрицательная (генотип dd). В этом случае вероятность рождения ребенка с отрицательным или положительным резусом одинакова и равна 50 %.
- 3) Отец и мать гетерозиготы по данному гену (Dd), оба резус - позитивны. В этом случае возможно (с вероятностью около 25%) рождение ребенка с отрицательным резусом.
Показания к назначению анализа:
- Определение трансфузионной совместимости;
- Гемолитическая болезнь новорожденных (выявление несовместимости крови матери и плода по резус-фактору);
- Предоперационная подготовка;
- Беременность (профилактика резус-конфликта).
Подготовка к исследованию: не требуется.
Материал для исследования: цельная кровь (с ЭДТА)
Метод определения: Фильтрация проб крови сквозь гель, импрегнированный моноклональными реагентами - агглютинация + гель-фильтрация (карточки, перекрестный метод).
Сроки исполнения: 1 день
Интерпретация результатов:
Результат выдается в форме:
Rh + положительная
Rh - отрицательная
При выявлении слабых подтипов антигена D (Du) выдается комментарий: "выявлен слабый резус-антиген (Du), рекомендуется при необходимости переливать резус-отрицательную кровь".
Анти - Rh (аллоиммунные антитела к резус-фактору и другим эритроцитарным антигенам)
Антитела к клинически наиболее важным эритроцитарным антигенам, в первую очередь резус-фактору, свидетельствующие о сенсибилизации организма к этим антигенам.
Функции. Резус-антитела относятся к так называемым аллоиммунным антителам. Аллоиммунные антиэритроцитарные антитела (к резус-фактору или другим эритроцитарным антигенам) появляются в крови при особых условиях - после переливания иммунологически несовместимой донорской крови или при беременности, когда эритроциты плода, несущие иммунологически чужеродные для матери отцовские антигены, проникают через плаценту в кровь женщины. У неиммунных резусотрицательных людей антител к резус-фактору нет. В системе резус различают 5 основных антигенов, основным (наиболее иммуногенным) является антиген D (Rh), который обычно подразумевают под названием резус-фактор. Помимо антигенов системы резус есть еще ряд клинически важных эритроцитарных антигенов, к которым может возникать сенсибилизация, вызывающая осложнения при переливании крови. Метод скринингового исследования крови на присутствие аллоиммунных антиэритроцитарных антител, использующийся в ИНВИТРО, позволяет, помимо антител к резус-фактору RH1(D), выявить в исследуемой сыворотке аллоиммунные антитела и к другим эритроцитарным антигенам.
Ген, кодирующий резус-фактор D (Rh), является доминантным, аллельный ему ген d - рецессивным (резус-положительные люди могут иметь генотип DD или Dd, резус-отрицательные - только генотип dd). Во время беременности резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом возможно развитие иммунологического конфликта матери и плода по резус-фактору. Резус-конфликт может привести к выкидышу или развитию гемолитической болезни плода и новорожденных. Поэтому определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребенка. Возникновение резус-конфликта и развитие гемолитической болезни новорожденных возможно в том случае, если беременная резус-отрицательна, а плод - резус-положителен. В случае, если у матери резус-антиген положительный, а у плода отрицательный, конфликт по резус-фактору не развивается. Частота развития резус-несовместимости составляет 1 случай на 200-250 родов.
Гемолитическая болезнь плода и новорожденных - гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО- (групповым) антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус-(С, Е, с, d, e) или М-, М-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам. Любой из указанных антигенов (чаще D-резус-антиген), проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в ее организме специфических антител. Проникновению антигенов в материнский кровоток способствуют инфекционные факторы, повышающие проницаемость плаценты, мелкие травмы, кровоизлияния и другие повреждения плаценты. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты. Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учета резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или выкидышей.
Во время первой беременности резус-положительным плодом у беременной с Rh "-" риск развития резус-конфликта составляет 10-15 %. Происходит первая встреча организма матери с чужеродным антигеном, накопление антител происходит постепенно, начиная, приблизительно с 7-8 недели беременности. Риск несовместимости возрастает с каждой последующей беременностью резус - положительным плодом, независимо от того, чем она закончилась (искусственным абортом, выкидышем или родами, операцией при внематочной беременности), при кровотечениях во время первой беременности, при ручном отделении плаценты, а также если роды проводятся путем кесарева сечения или сопровождаются значительной кровопотерей. при переливании резус-положительной крови (в том, случае, если они проводились даже в детском возрасте). Если последующая беременность развивается с резус-отрицательным плодом, несовместимость не развивается.
Всех беременных женщин с Rh "-" ставят на специальный учет в женской консультации и проводят динамический контроль над уровнем резус-антител. В первый раз анализ на антитела надо сдать с 8-й до 20-й недели беременности, и затем периодически проверять титр антител: 1 раз в месяц до 30-й недели беременности, дважды в месяц до 36-й недели и 1 раз в неделю до 36-й недели. Прерывание беременности на сроке менее 6-7 недель может не привести к формированию у матери Rh-антител. В этом случае при последующей беременности, если у плода будет положительный резус-фактор, вероятность развития иммунологической несовместимости вновь будет равна 10-15 %.
Проведение тестирования на аллоиммунные антиэритроцитарные антитела важно также при общей предоперационной подготовке, особенно для людей, которым ранее уже проводилось переливание крови.
Показания к назначению анализа:
- Беременность (профилактика резус-конфликта);
- Наблюдение за беременными с отрицательным резус-фактором;
- Невынашивание беременности;
- Гемолитическая болезнь новорожденных;
- Подготовка к гемотрансфузии.
Подготовка к исследованию: не требуется.
Материал для исследования: цельная кровь (с ЭДТА)
Метод определения: метод агглютинации + гель-фильтрации (карточки). Инкубация стандартных типированных эритроцитов с исследуемой сывороткой и фильтрация путем центрифугирования смеси через гель, импрегнированный полиспецифическим антиглобилиновым реагентом. Агглютинированные эритроциты выявляются на поверхности геля или в его толще.
В методе используются суспензии эритроцитов доноров группы 0(1), типирован-ные по антигенам эритроцитов RH1(D), RH2(C), RH8(Cw), RH3(E), RH4(c), RH5(e), KEL1(K), KEL2(k), FY1(Fy a) FY2(Fy b), JK (Jk a), JK2(Jk b), LU1 (Lu a), LU2 (LU b), LE1 (LE a), LE2 (LE b), MNS1(M), MNS2 (N), MNS3 (S), MNS4(s), P1 (P).
Сроки исполнения: 1 день
При обнаружении аллоиммунных антиэритроцитарных антител проводится их полуколичественное определение.
Результат выдается в титрах (максимальное разведение сыворотки, при котором еще обнаруживается положительный результат).
Единицы измерения и коэффициенты пересчета: Ед/мл
Референсные значения: отрицательно.
Положительный результат: Сенсибилизация к резус-антигену или другим эритроцитарным антигенам.
Почему возникает конфликт «мать-плод»?
Конфликт «мать- плод» возникает при несовместимости крови матери и плода, когда в крови матери образуются антитела, повреждающие эритроциты плода, что приводит к гемолитической болезни новорожденного. В основе этого явления лежит различие крови человека по группам в зависимости от наличия в эритроцитах разных антигенов, а в плазме - общегрупповых антител. Число групповых антигенов большое, и они определяют группу крови. Ребенок получает систему группы крови от отца и матери, согласно закону Менделя. Практически определить группу нетрудно. Не все антигены одинаково распространены и одинаково сильны, поэтому не все вызывают серологический конфликт. Чаще всего возникает несовместимость по резус-фактору и АВ0-системе.
Конфликт по системе АВО
Изоиммунизация может развиться в результате несовместимости крови матери и плода по системе АВО, Когда у матери О(I) группа крови, а у плода любая другая. Антигены А и В плода могут проникать во время беременности в кровоток матери, приводя к выработке иммунных альфа- и бетта- антител соответственно и развитию у плода реакции
антиген-антитело. Групповая несовместимость матери и плода хотя и встречается чаще, чем несовместимость по резус фактору, гемолитическая болезнь плода и новорожденного при этом протекает легче и, как правило, не требует интенсивной терапии.
Почему происходит иммунологический конфликт?
Первая группа крови не содержит в эритроцитах антигенов А и В, зато имеются антитела α и β. Во всех остальных группах такие антигены есть и поэтому первая группа крови, встретившись с чужеродными для нее антигенами А или В начинает с ними «вражду», разрушая эритроциты содержащие в себе эти антигены. Именно этот процесс и является иммунологическим конфликтом по системе АВ0.
Немного физиологии.
Давайте разберемся, что такое группа крови и почему такой конфликт во время беременности может возникать. Вспомним школьную биологию. Кровь состоит из клеток крови (эритроцитов, лейкоцитов) и плазмы (жидкой части). Эритроциты выглядят как красные двояковогнутые диски.
В эритроците находится огромное количество гемоглобина - сложного белка, который может переносить кислород. Подсчитано, что каждый эритроцит содержит более 3 миллионов молекул гемоглобина.
Также на поверхности эритроцитов могут располагаться специальные белки, так называемые агглютиногены. Их наличие у каждого человека индивидуально. Если эритроциты, на которых есть определенные агглютиногены, попадают в организм человека, у которого таких агглютиногенов нет, он воспринимает их как чужеродные и вырабатывает против них специальные антитела - агглютинины. Предназначение таких антител - разрушение чужеродных эритроцитов. Приблизительно такая ситуация возникает при конфликте групп крови мамы и ребенка во время беременности. То же происходит и при переливании несовместимой крови.
Агглютиногенов на самом деле огромное количество, но в практической медицине обычно определяют всего несколько. Это агглютиногены A, B, и D. Именно по наличию этих агглютиногенов и судят о группе крови человека:
I группа - на эритроцитах нет агглютиногенов А и В.
II группа - на эритроцитах есть агглютиноген А.
III группа - на эритроцитах есть агглютиноген В.
IV группа - на эритроцитах есть агглютиногены А и В.
А агглютиноген D определяет резус-фактор. Если он есть на эритроцитах - кровь считается резус-положительной, а если нет - резус-отрицательной.
Кому стоит опасаться возникновения конфликта по группе крови?
Теоретически такая проблема может возникнуть в том случае, если у матери с будущим малышом оказываются разные группы крови:
- женщина с I или III группой крови - плод со II;
- женщина с I или II группой крови - плод с III;
- женщина с I, II или III группой - плод с IV.
- получавшие в прошлом переливание крови;
- пережившие несколько выкидышей или абортов;
- родившие ранее ребенка, у которого развилась гемолитическая болезнь или отставание психического развития.
- женщина с I группой + мужчина со II, III или IV;
- женщина со II группой + мужчина с III или IV;
- женщина с III + мужчина со II или IV.
Что способствует развитию конфликта?
От развития конфликта по группам крови защищает правильно функционирующая и здоровая плацента. Её особенное строение не позволяет крови матери и плода смешиваться, в частности, благодаря плацентарному барьеру. Однако это все-таки может произойти при нарушении целостности сосудов плаценты, её отслойке и других повреждениях или, что чаще всего, во время родов. Попавшие в материнское кровяное русло клетки плода, в случае их чужеродности, вызывают выработку антител, которые обладают возможностью проникновения в организм плода и атаки клеток его крови, вследствие чего происходит гемолитическая болезнь. Токсическое вещество билирубин, образующееся в результате такого воздействия в больших количествах, способно повреждать органы ребенка, в основном мозг, печень и почки, что может грозить серьезными последствиями для физического и умственного здоровья малыша.
Проявления группового конфликта, его лечение и профилактика
Беременная женщина не будет ощущать никаких признаков развития конфликта по группам крови. Узнать о его возникновении поможет анализ крови, который покажет высокий титр антител в крови женщины. При развитии гемолитической болезни плода и новорожденного могут наблюдаться:
- отеки,
- желтушность,
- анемия,
- увеличение селезенки и печени.
Сенсибилизация по системе АВО не является большой проблемой. Важно знать о ней, дважды за беременность проверять титр антител и не перенашивать беременность, так как именно запоздалые роды дают самые тяжелые формы ГБН, требующие заменного переливания крови.
Некоторые врачи-гинекологи регулярно назначают беременным женщинам с первой группой крови анализ на групповые антитела в том случае, если для этого имеются предпосылки. На деле это происходит очень редко, по причине того, что конфликт по системе АВ0 обычно не влечет за собой серьезных последствий и вызывает желтуху только уже у рожденного ребенка, практически не влияя на плод в утробе. Поэтому здесь не существует таких массовых исследований как при беременности резус-отрицательной женщины.
В конфликте по системе АВО плод не болеет, а у новорожденного нет анемии. Однако проявления желтухи в первые дни жизни очень тяжелые и многие дети требуют лечения.
В большинстве случаев гемолитическая болезнь новорожденных о системе АВО не повторяется у последующих детей, (то есть повторные беременности протекают как правило легче- в отличие от резус -сенсибилизации)
, но и исключать ее (ГБН) нельзя.Поскольку жизни плода угрозы нет, массовая диагностика АВО-конфликта у беременных не проводится.
Отличительной особенностью иммуноконфликта по системе АВО является более позднее появление признаков гемолитической болезни у новорожденного. Как правило, только на 3-6-й день жизни начинает появляться желтушное окрашивание кожи ребенка, что нередко констатируется как физиологическая желтуха, и только при тяжелых формах гемолитической болезни, которая наблюдается в одном случае на 200-256 родов, своевременно устанавливают правильный диагноз. Такие несвоевременно диагностируемые формы гемолитической болезни новорожденных по системе АВО нередко оставляют последствия у детей.
Гемолитическая болезнь новорожденного требует обязательного лечения во избежание развития тяжелых осложнений. Чем ярче выражены симптомы, тем интенсивнее конфликт, для подтверждения которого проводят анализ крови на повышенное содержание билирубина. Смысл лечения заключается в удалении из крови ребенка антител, поврежденных эритроцитов и излишнего билирубина, для чего проводится фототерапия и другое симптоматическое лечение. В том случае, если это не помогает, или уровень билирубина в крови растет очень быстро, то прибегают к процедуре переливания крови новорожденному.
Будущим родителям, попадающим под риск развития такого конфликта, необходимо знать, что, во-первых, вероятность возникновения реального конфликта по группам крови на практике очень мала, а во-вторых, он чаще всего протекает гораздо легче резус-конфликта, и случаи тяжелого течения сравнительно редки, поэтому конфликт по системе АВ0 считается менее опасным для здоровья малыша.
Учение о группах крови возникло из потребностей клинической медицины. Переливая кровь от животных человеку или от человека человеку, врачи нередко наблюдали тяжелейшие осложнения, иногда заканчивавшиеся гибелью реципиента.
С открытием венским врачом К.Ландштейнером (1901) групп крови стало понятно, почему в одних случаях трансфузии крови проходят успешно, а в других заканчиваются трагически для больного. К.Ландштейнер впервые обнаружил, что плазма, или сыворотка, одних людей способна агглютинировать (склеивать) эритроциты других людей. Это явление получило наименование изогемагглютинации. В основе ее лежит наличие в эритроцитах антигенов, названных агглютиногенами и обозначаемых буквами А и В, а в плазме - природных антител, или агглютининов, именуемых a и b. Агглютинация эритроцитов наблюдается лишь в том случае, если встречаются одноименные агглютиноген и агглютинин: А и α, В и β.
Установлено, что агглютинины, являясь природными антителами (AT), имеют два центра связывания, а потому одна молекула агглютинина способна образовать мостик между двумя эритроцитами. При этом каждый из эритроцитов может при участии агглютининов связаться с соседним, благодаря чему возникает конгломерат (агглютинат) эритроцитов.
В крови одного и того же человека не может быть одноименных агглютиногенов и агглютининов, так как в противном случае происходило бы массовое склеивание эритроцитов, что несовместимо с жизнью. Возможны только четыре комбинации, при которых не встречаются одноименные агглютиногены и агглютинины, или четыре группы крови: I - 0 (αβ), II - A (β), III - B (α), IV - АВ (0).
Кроме агглютининов, в плазме, или сыворотке, крови содержатся гемолизины, их также два вида и они обозначаются, как и агглютинины, буквами α и β. При встрече одноименных агглютиногена и гемолизина наступает гемолиз эритроцитов. Действие гемолизинов проявляется при температуре 37-40°С. Вот почему при переливании несовместимой крови у человека уже через 30-40 с наступает гемолиз эритроцитов. При комнатной температуре, если встречаются одноименные аглютиногены и агглютинины, происходит агглютинация, но не наблюдается гемолиза.
В плазме людей с II, III, IV группами крови имеются антиагглютиногены, покинувшие эритроцит и ткани. Обозначаются они, как и агглютиногены, буквами А и В
Серологический состав основных групп крови (система АВО)
Как видно из приводимой таблицы, I группа крови не имеет агглютиногенов, а потому по международной классификации обозначается как группа 0, II - носит наименование A, III - В, IV - АВ.
Для решения вопроса о совместимости групп крови пользуются следующим правилом: среда реципиента должна быть пригодна для жизни эритроцитов донора (человек, который отдает кровь). Такой средой является плазма, следовательно, у реципиента должны учитываться агглютинины и гемолизины, находящиеся в плазме, а у донора - агглютиногены, содержащиеся в эритроцитах. Для решения вопроса о совместимости групп крови смешивают исследуемую кровь с сывороткой, полученной от людей с различными группами крови. Агглютинация происходит в случае смешивания сыворотки I группы с эритроцитами II, III и IV групп, сыворотки II группы - с эритроцитами III и IV групп, сыворотки III группы - с эритроцитами 11 и IV групп.
Следовательно, кровь I группы совместима со всеми другими группами крови, поэтому человек, имеющий I группу крови, называется универсальным донором. С другой стороны, эритроциты
IV группы крови не должны давать реакции агглютинации при смешивании с плазмой (сывороткой) людей с любой группой крови, поэтому люди с IV группой крови называются универсальными реципиентами.
Почему же при решении вопроса о совместимости не принимают в расчет агглютинины и гемолизины донора? Это объясняется тем, что агглютинины и гемолизины при переливании небольших доз крови (200-300 мл) разводятся в большом объеме плазмы (2500-2800 мл) реципиента и связываются его антиагглютининами, а потому не должны представлять опасности для эритроцитов.
В повседневной практике для решения вопроса о группе переливаемой крови пользуются иным правилом: переливаться должны одногруппная кровь и только по жизненным показаниям, когда человек потерял много крови. Лишь в случае отсутствия одногруппной крови с большой осторожностью можно перелить небольшое количество иногруппной совместимой крови. Объясняется это тем, что приблизительно у 10-20% людей имеется высокая концентрация очень активных агглютининов и гемолизинов, которые не могут быть связаны антиагглютининами даже в случае переливания небольшого количества иногруппной крови.
Постгрансфузионные осложнения иногда возникают из-за ошибок при определении групп крови. Установлено, что агглютиногены А и В существуют в разных вариантах, различающихся по своему строению и антигенной активности. Большинство из них получило цифровое обозначение (A 1 , А 2 , А 3 и т.д., B 1 , В 2 и т.д.). Чем больше порядковый номер агглютиногена, тем меньшую активность он проявляет. И хотя разновидности агглютиногенов А и В встречаются относительно редко, при определении групп крови они могут быть не обнаружены, что может привести к переливанию несовместимой крови.
Следует также учитывать, что большинство человеческих эритроцитов несет антиген Н. Этот АГ всегда находится на поверхности клеточных мембран у лиц с группой крови 0, а также присутствует в качестве скрытой детерминанты на клетках людей с группами крови А, В и АВ. Н - антиген, из которого образуются антигены А и В. У лиц с 1 группой крови антиген доступен действию анти-Н-антител, которые довольно часто встречаются у людей со II и IV группами крови и относительно редко у лиц с III группой. Это обстоятельство может послужить причиной гемотрансфузионных осложнений при переливании крови 1 группы людям с другими группами крови.
Концентрация агглютиногенов на поверхности мембраны эритроцитов чрезвычайно велика. Так, один эритроцит группы крови A 1 содержит в среднем 900000-1700000 антигенных детерминант, или рецепторов, к одноименным агглютининам. С увеличением порядкового номepa агглютиногена число таких детерминант уменьшается. Эритроцит группы А² имеет всего 250000-260000 антигенных детерминант, что также объясняет меньшую активность этого агглютиногена.
В настоящее время система АВО часто обозначается как АВН, а вместо терминов «агглютиногены» и «агглютинины» применяются термины «антигены» и «антитела» (например, АВН-антигены и АВН-антитела).
Понятие «группы крови появилось впервые именно по отношению к эритроцитарной антигенной системе АВО. В 1901 году Карл Ландштейнер, смешивая эритроциты с сыворотками крови разных людей, обнаружил процесс склеивания эритроцитов (агглютинацию), причем происходил он лишь при определенных сочетаниях сыворотки и эритроцитов. Сейчас всем известно, что существует 4 группы крови. На каком же основании кровь всех людей планеты можно разделить всего на 4 группы. Оказывается по наличию или отсутствию в мембране эритроцитов всего двух антигенов – эти антигены Ландштейнер назвал антигенами А и В. Обнаружены 4 варианта присутствия этих антигенов на мембране эритроцитов.
ВариантI (внимание! Группы крови во всем мире обозначаются римскими цифрами) – мембрана эритроцитов не содержит ни антигена А, ни антигена В, такая кровь отнесена к группеI и обозначается О (I), вариант II – эритроциты содержат только антиген А – вторая группа А (II), вариант III – мембрана эритроцитов содержит только антиген В – третья группа B (III), мембрана эритроцитов людей с IV группой крови содержит оба антигена AB (IV). Примерно 45% жителей Европы имеют группу крови А, около 40% - О, 10% - В и 6% - АВ, а у 90% коренных жителей Северной Америки группа крови – 0, у 20% жителей центральной Азии группа крови В.
Почему же иногда происходит реакция агглютинации при смешивании эритроцитов одного человека с сывороткой другого, а иногда ее нет? Дело в том, что сыворотка крови содержит уже «готовые» антитела к антигенам А и В , эти антитела называются естественными. Специфичным к антигены А является антитело α – при контакте мембраны эритроцита содержащего антиген А и антитела α происходит склеивание эритроцитов – реакция агглютинации, то же наблюдается и при встрече антигена В с антителом β. Поэтому антителаα и β назвали агглютининами. Отсюда понятно, что кровь, содержащая одновременно антиген А и антитело α н е может существовать, так же как В и β. В крови одного и того же человека не может быть одноименных агглютиногенов и агглютининов.
Агглютинины распределены в соответствии с антигенами следующим образом:
Как видим, в норме никакой агглютинации быть не может, а вот если кровь второй группы смешать с кровью третьей, то антиген А, встретившись с антителом α вызовет реакцию антиген-антитело и приведет к агглютинации эритроцитов, хорошо, если это произойдет в пробирке, т.к. в сосудах склеивание эритроцитов приведет к их массовой гибели, закупорит капилляры, вызовет внутрисосудистое свертывание крови – такая ситуация называется гемотрансфузионный шок и может закончиться гибелью реципиента. Вот почему так важно уметь определить группу крови по системе АВО. Для того чтобы определить группу крови по этой системе нужно просто обнаружить (или не обнаружить) один из двух антигенов, или оба вместе. Поскольку природа уже приготовила специфичные для этих антигенов антитела, сделать это не составляет труда, т.к. реакция агглютинации - надежный признак того, что произошла встреча одноименных антигена и антитела.
ГРУППЫ КРОВИ СИСТЕМЫ РЕЗУС
Антигены системы резус: 6 аллелей 3 генов системы Rh кодируют Аг: c, C, d, D, e, E. Они находятся в сочетаниях, например, CDE/cdE. Всего возможно 36 комбинаций.
Rh-положительная и Rh-отрицательная кровь:
Если генотип конкретного человека кодирует хотя бы один из Аг C, D и E, кровь такого человека будет резус–положительной.. Резус–отрицательны только лица фенотипа cde/cde (rr).
Итак - если мембрана эритроцитов человека содержит один из антигенов системы резус, то его кровь считается резус-положительной (на практике резус-положительными считают лиц, имеющих на поверхности эритроцитов Аг D - сильный иммуноген).
Группы крови системы АВ0
Группы крови системы АВ0 были открыты в 1900 году К.Ландштейнером, который смешивая эритроциты одних лиц с сывороткой крови других лиц, обнаружил, что при одних сочетаниях кровь свертывается, образуя хлопья (реакция агглютинации), а при других нет. На основании этих исследований Ландштейнер разделил кровь всех людей на три группы: А, В и С. В 1907 году была обнаружена еще одна группа крови.
Было установлено, что реакция агглютинации происходит при склеивании антигенов одной группы крови (их назвали агглютиногенами), которые находятся в красных кровяных тельцах - эритроцитах с антителами другой группы (их назвали агглютининам), находящимися в плазме - жидкой части крови. Разделение крови по системе АВ0 на четыре группы основано на том, что кровь может содержать или не содержать антигены (агглютиногены) А и В, а также антитела (агглютинины) α (альфа или анти-А) и β (бета или анти-Б).
Первая группа крови - 0 (I)
I группа - не содержит агглютиногенов (антигенов), но содержит агглютинины (антитела) α и β. Она обозначается 0 (I). Так как эта группа не содержит инородных частиц (антигенов), то ее можно переливать всем людям. Человек с такой группой крови является универсальным донором.
Вторая группа крови А β (II)
II группа содержит агглютиноген (антиген) А и агглютинин β (антитела к агглютиногену В). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген В - это I и II группы.
Третья группа крови Вα (III)
III группа содержит агглютиноген (антиген) В и агглютинин α (антитела к агглютиногену А). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген А - это I и III группы.
Четвертая группа крови АВ0 (IV)
IV группа крови содержит агглютиногены (антигены) А и В, но содержит агглютининов (антител). Поэтому ее можно переливать только тем, у кого такая же, четвертая группа крови. Но, так как в крови таких людей нет антител, способных склеиться с вводимыми извне антителами, то им можно переливать кровь любой группы. Люди с четвертой группой крови являются универсальными реципиентами.
Группы крови по системе АВО
Методика определения групп крови
Групповая принадлежность крови по системе АВО определяется при помощи реакции агглютинации. В настоящее время существует три способа определения групп крови по системе АВО:
По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам;
С помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).
Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам
Суть метода сводится к обнаружению в испытуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных сывороток. Для этих целей используется реакция агглютинации. Пробу нужно делать в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25° С.
Для проведения пробы необходимы: - Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных серий. Сыворотки для определения групп крови изготавливают из донорской крови в специальных лабораториях. Хранятся сыворотки в холодильнике при температуре 4 - 8° С. Срок годности сыворотки указывают на этикетке. На этикетке также указывается титр (то максимальное разведение сыворотки, при котором может наступить реакция агглютинации), который должен быть не ниже 1: 32 (для сыворотки В (III) - не ниже 1:16 /32). Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков гниения. Стандартные сыворотки для удобства подкрашивают в определенный цвет: О (I) - бесцветная (серая), А (II) - синяя, В (III) - красная, АВ (IV) - ярко-желтая. Эти цвета сопутствуют всем этикеткам на препаратах крови, имеющих групповую принадлежность (кровь, эритроцитная масса, плазма и др.).
Белые фарфоровые или эмалированные тарелки или другие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные, согласно группам крови.
Изотонический раствор хлорида натрия.
Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).
Техника проведения реакции.
1. Под соответствующими обозначениями группы крови на тарелку (пластинку) наносят сыворотку I, II, III групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля диаметром около 1 см). Чтобы избежать ошибок, наносят две серии сывороток, поскольку одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Таким образом, получается 6 капель, образующих два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: 0 (I), А (II), В (III).
2. Кровь для исследований берут из пальца или из вены. Сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек последовательно переносят 6 капель исследуемой крови величиной примерно с булавочную головку 0,01 мл (маленькая капля), каждую рядом с каплей стандартной сыворотки. Причем количество сыворотки должно в 10 раз превышать количество исследуемой крови. Затем их осторожно перемешивают между собой стеклянными палочками с закругленными краями.
Возможна и более простая методика: на тарелку наносится одна большая капля крови, потом ее забирают оттуда уголком предметного стекла и переносят каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая ее с последней. При этом кровь каждый раз берут чистым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не смешивались.
3. Смешав капли, тарелку периодически покачивают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд. Но наблюдение следует вести не менее 5 минут, так как возможна более поздняя агглютинация, например с эритроцитами группы А 2 (II).
4. В те капли, где произошла реакция, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результаты реакции.
Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной
При положительной реакции в течение первых 10-30 секунд наблюдают в смеси видимые невооруженным глазом мелкие красные зернышки (агглю-тинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие зернышки постепенно сливаются в более крупные зерна или даже в хлопья неправильной формы. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет.
Результаты реакций двух серий в каплях с сывороткой одной и той же группы должны совпадать.
Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками.
Если все сыворотки дали положительную реакцию, значит, испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В. Но в таких случаях, чтобы исключить неспецифическую реакцию агглютинации, следует провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной сывороткой группы АВ (IV).
Определение групп крови моноклональными антителами
Для определения групп крови этим способом используют моноклинальные антитела, которые получают с помощью гибридомной, биотехнологии.
Гибридома - это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, который синтезирует специфические моноклональные антитела. Гибридома обладает способностью к неограниченному росту, характерна для опухолевой клетки и присущей лимфоциту способностью синтезировать антитела.
Разработаны стандартные реагенты-моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, применяемые для определения агглютиногенов эритроцитов. Цоликлоны представляют собой лиофилизированный порошок красного (анти-А) и синего (анти-В) цвета, который разводят изотоническим раствором хлорида натрия непосредственно перед пробой.
Техника проведения.
Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител следует нанести по одной маленькой капле исследуемой крови. После перемешивания компонентов наблюдают за реакцией агглютинации в течение 2-3 минут. Оценка результатов очень проста.
Определение групповой принадлежности крови может сопровождаться ошибками, которые ведут к неправильной трактовке результатов. Можно выделить три основные группы ошибок: ошибки, связанные с низким качеством реагентов; технические ошибки; ошибки, связанные с особенностями Схема оценки результатов определения групп крови спомощью моноклональных антител(цоликлоны анти-А и анти-В)исследуемой крови. Первых двух можно избежать, строго соблюдая описанные выше требования к сыворотке, условиям проведения реакции и др. Третья группа связана с явлением неспецифической панагглютинации (феномен Томсена), сущность которого состоит в том, что сыворотка при комнатной температуре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже со своими собственными (аутоагглютинация), а эритроциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, даже с сывороткой группы АВ. Подобное явление описано при ряде заболеваний: болезнях крови, спленомегалии, циррозе печени, инфекционных заболеваниях и др. Описана также панагглютинация и аутоагглютинация у здоровых людей.
Явление панагглютинации и аутоагглютинации наблюдается только при комнатной температуре. Если определение групповой принадлежности проводить при температуре 37° С, они исчезают.
Нужно строго помнить, что во всех случаях нечеткого или сомнительногскрезультата следует провести повторное определение групп крови при помощи стандартных сывороток других серий, а также перекрестным способом.
66. Методы определения групп крови по системам аво и резус.
Для проведения исследования необходимы стандартные гемагглютинирующие сыворотки I (О), II (А), III (В), IV (АВ), причем первые три варианта сыворотки должны быть представлены двумя сериями.
Сыворотка должна быть пригодной для использования, для этого обязательно проверяют соответствие ее сроку годности, указанному на этикетке сыворотки, определяют визуально ее состояние. Нельзя использовать сыворотку, если она является мутной, содержит посторонние примеси, хлопья, взвесь, изменила цвет.
Сыворотка считается пригодной для использования, если она является прозрачной, ампула имеет этикетку, на которой указаны основные ее свойства (серия, срок годности, групповая принадлежность, цветная маркировка соответственно групповой принадлежности), ампула не повреждена, не вскрыта.
Необходимы чистая тарелка, которую необходимо разделить на четыре части, отметив соответствие каждой определенной группе крови, игла-скарификатор, стерильные ватные тампоны, чистое сухое обезжиренное предметное стекло, спирт. На тарелку в соответствии с маркировкой наносят по капле каждой сыворотки. Затем кожу подушечки четвертого пальца левой руки обрабатывают стерильным ватным тампоном со спиртом. С помощью скарификатора прокалывают кожу, удаляя первую выступившую каплю крови (примесь к ней спирта и тканевой жидкости может исказить результаты исследования). Следующую каплю крови забирают уголком предметного стекла, для каждой капли сыворотки – чистым уголком стекла. Для исследования к капле гемагглютинирующей сыворотки добавляют каплю крови в соотношении 10: 1. Затем, аккуратно поворачивая и покачивая тарелку, производят перемешивание крови. Агглютинация обычно выявляется в виде выпадения хлопьев, которые хорошо визуализируются. Для уточнения результата к капле добавляют изотонический раствор хлорида натрия, после чего с достаточной достоверностью оценивают результат.
Одним из обязательных условий проведения исследования является соблюдение температурного режима.
Оптимальной является температура 20 – 25 оС, поскольку уже ниже 15 оС отмечается холодовая агглютинация, резко нарушающая специфичность данной пробы, а при температуре окружающей среды выше данного интервала скорость реакции агглютинации резко замедляется.
Если гемагглютинация происходит в капле с сыворотками I (О), III (В), но не происходит с сывороткой II (А), причем результат аналогичен с сыворотками двух сывороток, это означает, что исследуемая кровь принадлежит III (B) группе по системе АВО.
Если гемагглютинация происходит в капле с сыворотками I (О), II (А), но не происходит с сывороткой III (В), это означает, что исследуемая кровь принадлежит II (А) группе по системе АВО.
Но возможна и такая ситуация, когда гемагглютинация не происходит ни с одной из исследуемых сывороток, причем обеих серий. Это означает, что исследуемая кровь не содержит агглютиногенов и принадлежит к I (О) группе по системе АВО.
Если же агглютинация происходит со всеми сыворотками, причем обеих серий, это означает, что исследуемая сыворотка содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к IV (АВ) группе по системе АВО.
Экспресс-метод определения групповой принадлежности крови по системе резус. Для исследования необходимо иметь стандартную антирезусную сыворотку, принадлежащую IV (АВ) группе по системе АВО, чашку Петри, изотонический раствор хлорида натрия, 30%-ный раствор реополиглюкина, чистое сухое обезжиренное предметное стекло. Вначале необходимо развести стандартную антирезусную сыворотку раствором реополиглюкина и нанести ее каплю на чашку Петри. Кроме того, на чашку Петри наносят каплю сыворотки IV (АВ) группы, которая не содержит антител. Забор крови производят аналогично способу, описанному при определении системы АВО. Каплю крови забирают с помощью угла предметного стекла, добавляют к капле сыворотки и аккуратно перемешивают. Другим углом забирают каплю для добавления к другой сыворотке и также перемешивают. Предварительный результат оценивают через 4 мин, затем к каждой капле необходимо добавить каплю изотонического раствора хлорида натрия, через 2 мин оценивается окончательный результат. Если в обеих каплях не наблюдается выпадения хлопьев агглютинации, это свидетельствует о том, что исследуемая кровь резус-отрицательная. Если же агглютинации произошла с обеими сыворотками, результат исследования нельзя считать достоверным. Наконец, если агглютинация произошла с антирезусной сывороткой, но не произошла с другой, контрольной, кровь считается резус-положительной.
67. Современные правила переливания крови по группам системы АВО и системы резус. Обязанности врача, переливающего кровь
Необходимость инфузии крови или её компонентов, а также выбор метода и определение дозировки переливания, определяются лечащим врачом на основании клинических симптомов и биохимических проб. Врач, осуществляющий переливание, обязан вне зависимости от данных предыдущих исследований и анализов, лично произвести следующие исследования: определить группу крови больного по системе ABO и сравнить полученные данные с историей болезни; определить группу крови донора и сравнить полученные данные с информацией на этикетке контейнера; проверить совместимость крови донора и больного; получить данные биологической пробы. Запрещается трансфузия крови и её фракций, не прошедшей анализы на СПИД, сывороточный гепатит и сифилис. Гемотрансфузия осуществляется с соблюдением всех необходимых асептических мер. Допускается инфузия крови или её фракций исключительно при совпадении резус-фактора донора и реципиента. В случае необходимости возможна инфузия резус-отрицательной крови первой группы человеку с любой группой крови в объёме до 0,5 л (только взрослым). Резус-отрицательную кровь второй и третьей группы можно трансфузировать человеку со второй, третьей и четвертой группой, вне зависимости от резус-фактора. Человеку с четвертой группой крови положительного резус-фактора можно переливать кровь любой группы. Эритроцитную массу резус-положительной крови первой группы можно инфузировать пациенту с любой группой при резус-положительном факторе. Кровь второй и третьей группы с резус-положительным фактором можно инфузировать человеку с четвертой резус-положительной группой. Так или иначе, перед трансфузией обязательно проведение теста на совместимость. При обнаружении в крови иммуноглобулинов редкой специфики необходим индивидуальный подход к выбору крови и проведение специфических тестов на совместимость.
Пробы на совместимость крови донора и реципиента перед переливанием.
Наконец, если выяснено, что кровь донора и кровь реципиента совпадают по системам АВО и резусу, для переливания необходимо произвести биологическую пробу на совместимость. Ее проводят с самого начала переливания крови. Подсоединив систему для переливания крови, открывают зажим и вводят примерно 20 мл крови донора струйно, затем зажим закрывают и внимательно наблюдают за реакцией пациента в течение 3 мин. Биологическая несовместимость крови донора и пациента в клинической практике встречается нечасто, но может быть очень опасной для здоровья реципиента. О наличии ее можно говорить, если наблюдаются гиперемия лица, психомоторное возбуждение, пациент стремится встать, могут отмечаться неадекватное поведение, тахикардия и тахипноэ, снижение артериального давления. Учащение дыхания может сочетаться с ощущением нехватки воздуха. Подобная реакция является абсолютным противопоказанием для переливания данному реципиенту крови данного донора. Однако это не исключает использования других порций донорской крови от данного лица другим пациентам. Если проведение биологической пробы не сопровождается появлением подобной реакции при повторении ее дважды, она считается пригодной для переливания. Трансфузию продолжают, однако в течение всего времени необходимо тщательно наблюдать за состоянием реципиента, его артериальным давлением, температурой тела, общим состоянием, частотой и ритмом дыхания, оценивать частоту и качество пульса, обращать внимание на субъективные ощущения пациента: чувство жара, ощущение нехватки воздуха, кожный зуд, боли в области поясницы, озноб и др. Подобный мониторинг состояния больного проводится в течение 4 ч после переливания крови, и если через это время реакции на переливание не отмечается, то проведенная гемотрансфузия считается успешной, проведенной без осложнений.
Определение группы крови системы АВ0
Используют стандартные сыворотки I II III IV группы крови 2-х серий.
Надеть передник, маску, очки, перчатки, нарукавники.
Методика проведения.
1. На чистую, сухую, обезжиренную тарелку капают по одной капле стандартных сывороток 2-х серий (6 капель). Каждая сыворотка капается отдельной пипеткой. Пипетки маркируются и находятся во флаконах с физ.раствором.
2. Рядом с каплей стандартной сыворотки палочкой или отдельной пипеткой наносится капля крови (соотношение сыворотка-кровь 10:1).
3. Капли тщательно перемешиваются отдельными палочками.
4. Покачивают тарелку и наблюдают результаты в течение 5минут. По истечению 3минут для исключения ложной агглютинации вносят по капле физ.раствора и продолжают наблюдение.
Определение результатов.
Сыворотки всех групп не дали реакции-исследуемая кровь относится к группе 0(I)
Сыворотки групп 0 (I) и В (III) дали положительную реакцию, сыворотка групп А (II) агглютинацию эритроцитов не вызывала – исследуемая кровь относится к группе А (II)
Сыворотки групп О(I) и А (II) дали положительную реакцию, сыворотка группы В (III) не дала реакцию – кровь отосится к группе
Сыворотки всех групп дали положительную реакцию – кровь можно отнести к группе АВ (IV) . нотолько в том случае, если при проведении контроля исследуемых эритроцитов со стандартной сывороткой группы АВ (IV) реакции агглютинации не будет. Положительная агглютинация с сывороткой АВ (IV)означает наличие неспецифической агглютинации.
Определение группы крови системы АВО моноклональными антителами .
Это современный метод определения группы крови АВО моноклональными реагентами(цоликлонами анти-А и анти-В).
Методика определения: Надеть передник, маску, перчатки, нарукавники
1. на тарелку в две ячейки капают по 1 каплецоликлоны анти-А и анти-В
2. Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь в соотношении сыворотка –кровь 10:1.
3. Смешивают реагенты отдельными стеклянными палочками.
4. Наблюдают за результатом 2,5 минут.
Определение результатов:
Агглютинации нет ни с цоликлоном анти-А, ни с цоликлоном анти-В-
кровь принадлежит к группе О(I)
Агглютинация наблюдается только с цоликлоном анти-А- кровь принадлежит к группе А (II)
Агглютинация наблюдается только с цоликлоном анти-В – кровь принадлежит к группе В (III)
Агглютинация наблюдается как с цоликлоном анти-А, так и с цоликлоном анти-В – кровь принадлежит к группе АВ (IV)
5. Пробы перед переливание крови .
Надеть маску, очки, передник, перчатки.
Из вены больного берут 5мл крови, центрифугируют и получают сыворотку.
А) Проба на индивидуальную совместимость: наносят 2-3 капли сыворотки на планшетку и добавляют каплю крови донора (10:1). Кровь смешивают с сывороткой сухой стеклянной палочкой, планшетку слегка покачивают и наблюдают за результатом.
Результат: отсутствие агглютинации-кровь совместима, есть агглютинация – кровь не совместима.
Б) Проба на резус-совместимость:
Написать на чистой пробирке фамилию, имя, отчество рецепиента и его группу крови, а так же номер флакона донора.
Внести на дно пробирки пастеровской пипеткой 2 капли сыворотки рецепиента, 1 каплю крови донора и 1 каплю 33% р-ра полиглюкина.
Перемешайте полученную в пробирке смесь и, наклоняя пробирку до горизонтального положения, поворачивайте ее таким образом, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки в нижней ее трети.
По истечении 5 минут долейте в пробирку2-3 мл изотонического раствора натрия хлорида и перемешайте содержимое путем 2-3 кратного переворачивания пробирки.
Результат:
1. Наличие агглютинации эритроцитов – кровь донора несовместима с кровью больного.
2. Нет признаков агглютинации – кровь совместима.
В) Биологическая проба.
Техника проведения:
Струйно переливать 10-15мл крови (эритроцитарной массы, плазмы), затем в течение 3-х минут наблюдать за больным. При отсутствии клинических проявлений реакции или осложнений (учащения пульса, дыхания, появления одышки, затрудненного дыхания и гиперемии лица ит.д.) вводят вновь 10-15 мл крови (эритроцитарной массы, плазмы и т. д.) и в течение 3-х минут наблюдают за больным. Такую же процедуру повторяют и в 3-й раз. Отсутствие реакции у больного после 3-х кратной проверки, является основанием для продолжения трансфузии. 10-15 мл крови оставляют во флаконе и хранят 1сутки в холодильнике.
6.После переливания крови реципиент в течение 2-часов соблюдает постельный режим и наблюдается врачом. Ежечасно ему измеряют температуру тела, АД, фиксируют эти показания в истории болезни. Контролируется наличие мочевыделения и нормального цвета мочи. На следующий день после переливания обязательно производят общий анализ мочи и крови. Записывается в историю болезни показание к гемотрансфузии и оформляется протокол переливания, содержащий следующие сведения:
– Ф.И.О больного
Группа крови и резус-принадлежность больного
Паспортные данные флаконов крови или компонентов, фамилию и инициалы донора, группу и резус-принадлежность крови, номер флакона, дату заготовки.
Результат контрольного определения группы крови больного
Результаты контрольного определения группы каждого флакона крови и ее компонентов.
Результаты проб на совместимость крови доноров и реципиента при комнатной температуре
Метод и результаты проб на совместимость при температуре
Результаты биологических проб
Состояние больного во время и после трансфузии.
/ 29
29 Методы определения групп крови и резус-фактора. Профилактика возможных ошибок
Определение групп крови с помощью стандартных сывороток. В лунки планшета для определения групп крови последовательно наносят пипетками по одной крупной капле стандартной сыворотки групп 0(1), А(П), В(Ш) двух различных серий каждой группы. Затем наносят в каждую лупку по капле исследуемой крови, в 5 - 10 раз меньшую сыворотки. Сухими стеклянными палочками или путем покачивания планшета смешивают стандартные сыворотки и исследуемую кровь. Через 5 минут оценивают результат (табл. 2).
Таблица 2
Определение групп крови с помощью стандартных сывороток
|
Группа исследуемой крови |
Стандартные сыворотки |
||
Определение групп крови по стандартным эритроцитам. В лунки планшета наносят большие капли плазмы исследуемой крови. Рядом с каждой каплей плазмы последовательно наносят по небольшой капле стандартных эритроцитов групп 0(1), А(II), В(III). Капли перемешивают покачиванием планшета. Через 5 минут к каждой капле смеси добавляют по 1 капле физиологического раствора и учитывают результат.
Таблица 3
Определение групп крови с помощью стандартных эритроцитов
|
Группа исследуемой крови |
Стандартные эритроциты |
||
Определение резус-фактора. На дно сухой пробирки наносят 1 большую каплю универсального реагента анти-резус, затем добавляют такую же каплю исследуемой крови. После встряхивания пробирки производят перемешивание сыворотки анти-резус и крови в течение 5 минут по стенкам пробирки, после чего добавляют 5 - 7 мл физиологического раствора. Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии резус-фактора.
Определение групп крови с помощью цоликлонов. Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками.
Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготовляются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител.
Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 5 - 10 мл. Цоликлон анти-А - желтого цвета, анти-В - синего, анти-АВ - бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия.
Техника определения групп крови. Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта, в том числе из пальца. Используется метод прямой гемагглютинации на пластине или планшете, определение производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 - 25 X.
Наносят на пластину или планшет индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.
Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 - 0,03 мл).
Смешивают кровь с реагентом, покачивая планшет.
Наблюдают за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3 - 5 секунд, но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.
Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агтлютинаты видны в виде мелких красных агретатов, быстро смешивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.
Интерпретация результатов реакции агглютинации с цоликлонами представлена в табл. 4.
Таблица 4
Определение групп крови с помощью цоликлонов
|
Группа исследуемой крови |
Стандартные эритроциты |
||
Примечание: знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) - се отсутствие
При положительном результате реакции агглютинации со всеми гремя цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую аглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешивают на плоскости 1 каплю исследуемых эритроцитов с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе AB(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.
Определение резус-фактора с помощью цоликлона. В лупку планшета наносят 1 большую каплю цоликлона анти-Д-супер т рядом наносят 1 маленькую каплю исследуемой крови.
Покачивая планшет, смешивают кровь с цоликлоном. За ходом реакции наблюдают в течение 3 минут. Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии резус-фактора.
